王芳��+康超��+李永霞��+余波+周思旋

摘要：根据GenBank中大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP基因序列，设计2对特异性的引物，通过对第1步和第2步PCR反应条件进行优化，建立大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白套式PCR诊断方法。结果表明，该方法重复性好，第1次PCR扩增敏感性达10 pg/mL，第2次PCR敏感性是1 fg/mL，对锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾[XCZ11.tif；%95%95，JZ]病毒、嗜水气单胞菌、柠檬酸杆菌、黄杆菌DNA扩增结果均为阴性。表明建立的套式PCR方法适合于大鲵虹彩病毒临床样品的快速诊断。

关键词：大鲵虹彩病毒；套式PCR；临床样品

中图分类号： S852.65+9.1文献标志码：

文章编号：1002-1302（2016）08-0291-03

近年来，大鲵人工养殖发展迅速，工厂化水平较高，苗种之间流通比较多，加之今年大鲵价格下降，养殖户大量采购苗种，忽视引种检疫，造成疾病大量暴发。其中，大鲵虹彩暴发最为严重，在陕西、四川、贵州等地报道较多，该病毒可引起大鲵大面积死亡[1-3]。目前，大鲵虹彩病毒的疫苗还处于研究阶段，市面上还没有商品化的疫苗[4-6]。因此，对大鲵虹彩病毒病的早期诊断及防治尤为重要。本研究根据GenBank中大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白MCP基因序列，设计2对特异性的引物，根据PCR反应条件优化，建立大鲵虹彩病毒主要衣壳蛋白套式PCR诊断方法，以期为临床样品的快速诊断、防治大鲵虹彩病毒病提供科学依据。

1材料与方法

1.1试验材料

毒株、菌株和细胞：大鲵虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、斑点叉尾[XCZ11.tif]病毒、嗜水气单胞菌、柠檬酸杆菌、黄杆菌均由贵州重大疫病监测防制重点实验室保存。鲤上皮瘤细胞购自上海拜力生物科技有限公司。……