杨静+吴慧+潘一展

摘要：为提高外源过氧化物酶基因在毕赤酵母中的表达量，对甲醇毕赤酵母诱导表达培养基进行优化，在培养基中添加0.5 g/L高铁血红素，每12 h补加100%甲醇至终浓度为0.5%，待酵母生长量达到最大值时加入0.5 mL/L微量元素混合物。结果表明，优化后培养基表达量是普通培养基的10.6倍，研究为后期外源蛋白进入发酵罐生产提供了理论依据。

关键词：过氧化物酶基因；毕赤酵母；优化培养基；血红素；微量元素

中图分类号：Q814文献标志码：

文章编号：1002-1302（2016）08-0051-02

近年来，酶工程在生物技术领域得到很大发展，过氧化物酶被应用于疾病诊断及治疗、农作物品种选育及病虫害防治、染料中脱色剂生产[1]、有机物和聚合物合成[2]、农业废弃物处理[3]等领域。但是，天然酶在开发和应用中受到一定限制。本研究采用基因重组技术生产酶，研究外源萝卜过氧化物酶在甲醇毕赤酵母中的表达，旨在探讨高表达量的优化培养条件。

1材料与方法

1.1材料

菌株：野生型毕赤酵母GS115（GS115）及商丘学院风景园林学院实验室构建的转萝卜过氧化物酶基因（RsPrxl）型毕赤酵母GS115（GSRP25）均由该实验室保存。

培养基 YPD、BMGY/BMMY组成和配制参见 Invitrogen 公司毕赤酵母操作手册。

1.2方法

1.2.1菌种活化挑取菌株 GSRP25在 YPD上进行平板划线培养，分离后，挑取单菌落进行优化诱导培养。

1.2.2转基因酵母的诱导表达培养挑取2个GSRP25单菌落分别接种于200 mL BMGY培养基中，pH值7.4、26 ℃、0.5%甲醇、225 r/min条件下培养[4]。待D600 nm达到2～3时，静置，收集菌体分别重悬于20 mL BMMY中和含有0.5 g/L血红素[5]的20 mL BMMY中培养，每12 h补加甲醇至终……