韩志霞+马金玉+王雪云+蒋大伟+刘芳+许兰菊+李克宇

摘要：为使IpaC基因表达产物保持天然的生物学活性，实现在酵母表达系统中高效表达，本研究在不改变IpaC蛋白氨基酸序列的情况下，根据酵母密码子偏爱性优化合成IpaC#基因，分别构建真核表达载体pGAPZαA-IpaC和pGAPZαA-IpaC#，然后将线性化重组质粒电转化至毕赤酵母X-33中，对阳性转化子用SDS-PAGE及Western blot检测其表达产物。结果表明，经SDS-PAGE及Western blot检测，仅在pGAPZαA-IpaC#/X-33重组菌表达产物菌体沉淀中检测到大小为70 ku的目的蛋白，实现了鸡源志贺菌IpaC# 基因在毕赤酵母中的胞内表达，从而验证毕赤酵母表达系统与外源基因序列的相关性，为进一步提高鸡源志贺菌IpaC基因在毕赤酵母中的高效表达提供科学依据，对研究该病的发病机制具有重要意义。

关键词：鸡源志贺菌；IpaC基因；毕赤酵母；优化密码子；pGAPZαA；真核表达

中图分类号：Q786；S852.61 文献标志码：

文章编号：1002-1302（2016）08-0039-04

志贺菌可以感染多种物种，不仅是人，志贺菌还可以引起猪、鼠、狐狸、兔、牛等多种动物痢疾，其中以幼年动物患病率最高，严重的会导致死亡[1]。在志贺菌侵袭肠道过程中，毒力大质粒上Ⅲ型分泌系统分泌的IpaC蛋白通过介导细胞骨架重排而使志贺菌趁机侵入肠上皮细胞，而且只有重组纯化的IpaC蛋白才能够在一定程度上恢复志贺菌的侵袭能力[2]。在分子水平上，IpaC蛋白不同结构域具有不同生物学功能[3-5]。志贺菌对人的侵袭感染机制的研究比较深入。鸡源志贺菌拥有与人源菌株相同的IpaC蛋白分子[6-8]，但是至今尚不清楚鸡肠上皮细胞是否存在与人肠上皮细胞相似的IpaC蛋白受体分子。……