王庸伯，纪中生

（1美国加州都柏林市山谷基督中学；2美国Sanovas公司，2597 Kerner Blvd, San Rafael, CA 94901 USA）

利用猪皮凝胶进行3D细胞培养

王庸伯1，纪中生2

（1美国加州都柏林市山谷基督中学；2美国Sanovas公司，2597 Kerner Blvd, San Rafael, CA 94901 USA）

组织细胞在培养基通常是平面生长。为了更好的模拟真实的生物组织，了解细胞之间的相互关系，多年来很多实验室开展了3D细胞培养技术研发。而一些3D培养的细胞已经用于药物筛选和组织再生等方面。本研究则以猪皮为材料制作培养基，利用它富含细胞生长的营养和支持结构以及它的溶胶与凝胶的特点实施3D细胞培养。

猪皮凝胶的基本制作方法如下：新鲜猪皮洗净后，在开水中煮沸5min，使皮肤与皮下组织脂肪之间的界限变得明显。然后将皮下组织脂肪去除干净，以保证制备的猪皮凝胶有较高的透明度，以利于在常规或者荧光显微镜下观察。然后将30g猪皮与100ml纯净水混合加热45min（此比例较为理想），取得液态部分冷却即为猪皮凝胶。制备的猪皮凝胶调整pH后，可以保持在低温冰箱长期使用，亦可冷冻干燥保存。

人的结肠癌细胞（HCT-116）和大鼠的神经细胞瘤细胞（neuro-2a）被分别培养在含DMEM/F12培养皿中达到90%的饱满，然后用0.05%胰酶（Trypsin）消化细胞；将重新悬浮的细胞被种植于在37℃预热的猪皮溶胶中。培养的细胞可以在猪皮溶胶中长期生长，而且可以长成组织块状或者细胞球状结构。如果需要制作组织切片，可以将培养皿放置于冰上或者放入冰箱，猪皮溶胶将成为凝胶，即可固定亦可直接观察。

这种方法简单易行，成本很低，细胞形成的3D结构体积较大，便于用于实验条件下研究细胞之间的相互关系与相互影响。……