吴海燕，王晓燕，邓晓杨，曾 俊

1.成都医学院第一附属医院 (成都 610500)；2.成都医学院 (成都 610500)

·论 著·

细胞周期素 E 与转录因子在子宫内膜癌的表达及意义

吴海燕1，王晓燕1，邓晓杨1，曾 俊2△

1.成都医学院第一附属医院 (成都 610500)；2.成都医学院 (成都 610500)

目的 检测细胞周期素 E (Cyclin E)与转录因子(Twist)在子宫内膜癌的表达，并探讨Cyclin E与Twist在子宫内膜癌发生发展中的关系。方法 采用免疫组化法检测子宫内膜癌中Cyclin E和Twist的表达情况，并用半定量方法对镜下的阳性细胞百分比以及染色强度给予评分。结果 Cyclin E在子宫内膜癌中的阳性表达率(71.25%)明显高于正常子宫内膜组织(6.00%)，差异有统计学意义(P<0.001)；Twist在子宫内膜癌中的阳性表达率(77.50%)明显高于正常子宫内膜组织(10.00%)，差异有统计学意义(P<0.001)。在子宫内膜癌中，Cyclin E和Twist的表达呈正相关(P<0.05)。结论 Cyclin E及Twist在子宫内膜癌中高表达，二者在子宫内膜癌的发生发展过程中存在一定联系。

子宫内膜癌； 细胞周期素 E； 转录因子

子宫内膜癌是较为常见的妇科恶性肿瘤，该病有逐年上升的趋势，严重威胁患者的身心健康，子宫内膜癌发生发展的分子机制尚不完全明确，涉及到多个癌基因的突变以及细胞周期的失常。Cyclin E是细胞周期中G1期的周期蛋白，该蛋白与人周期素依赖性激酶2(CDK-2)在细胞的G1期共同发挥作用，协助细胞进入S期。Cyclin E过度表达可以导致细胞的增殖失控，可能是肿瘤形成的内源性因素[1]。Twist是一种致癌基因，其广泛参与器官组织的生长发育调控，具有促进血管形成、抑制细胞凋亡、增进细胞增殖、促进肿瘤形成等作用，在肿瘤的浸润、侵蚀和转移过程中起到重要作用[2]。本试验通过检测Cyclin E和Twist在子宫内膜癌中的表达水平，探讨二者与子宫内膜癌发生发展的关系。

1 资料和方法

1.1 临床资料

收集2012年7月至2014年1月成都医学院附属医院手术切除的子宫内膜癌标本的存档蜡块80例。 按照国际妇产科联盟(FIGO)的分期标准，临床分期：Ⅰ期21例，Ⅱ期23例，Ⅲ期24例，Ⅳ期12例； 病理分级：G1级25例，G2级36例，G3级19例。所有患者在手术前均未接受过化疗、放疗，且临床及病理资料完整。选取同期因子宫肌瘤而行子宫切除术，且病理证实子宫内膜正常的存档蜡块50例作为对照。

1.2 方法

1.2.1 试验试剂 鼠抗人 Cyclic E单克隆抗体购自Barkers公司。浓缩型鼠抗人 Twist 多克隆抗体购自Santa Cruz 公司。S-P 试剂盒、DAB 显色剂均购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司。

1.2.2 试验方法 采用免疫组化法(SP法) 检测Cyclin E及Twist的表达。标本由浓度为10%的甲醛溶液固定，石蜡包埋，常规切片为4 μm，具体染色步骤严格按照试剂盒的说明书进行操作。

1.2.3 染色结果判定标准 用双盲阅片法，由两位经验丰富的病理科医师分别阅片。Cyclin E和Twist的阳性表达以染色呈棕黄色颗粒为阳性结果。用半定量结果判断方法，对镜下的阳性细胞百分比以及染色强度给予评分[3]。细胞染色强度评分标准：阴性为0分，弱阳性为1分，中度阳性为2分，强阳性为3分；阳性细胞百分比评分：在每个切片上观察5个高倍视野(×200)，对阳性细胞的百分比进行计数，阳性细胞数<5%为0分，5%～25%为1分， 26%～50%为2分，51%～75%为3分，76%～100%为4分。以上二者的分值相乘为细胞染色的阳性等级：0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.3 统计学方法

采用SPSS 17.0 统计学软件进行数据处理，定性资料采用例数(%)描述，组间比较采用2检验，Cyclin E和Twist表达阳性率的相关性分析运用列联系数方法。检验水准α设定为0.05。

2 结果

2.1 Cyclin E和Twist在正常子宫内膜与子宫内膜癌中的表达比较

Cyclin E在子宫内膜癌中的阳性表达率为71.25%(57/80)，在正常子宫内膜中的阳性表达率为6.00%(3/50)，差异有统计学意义(P<0.05)；Twist在子宫内膜癌中的阳性表达率为77.50%(62/80)，在正常子宫内膜中的阳性表达率为10.00%(5/50)，差异有统计学意义(P<0.001)(表1～2)。

表1 Cyclin E在正常子宫内膜与子宫内膜癌中的表达[n(%)]

表2 Twist在正常子宫内膜与子宫内膜癌中的表达[n(%)]

2.2 Cyclin E和Twist表达与子宫内膜癌临床病理特征的关系

Cyclin E和Twist表达与子宫内膜癌的临床分期、病理分级、淋巴结转移具有相关性(P<0.001)，而与子宫内膜癌患者的年龄无相关性(P>0.05)(表3～4)。

表3 Cyclin E与正常子宫内膜和子宫内膜癌中临床病理特征的关系

分组例数-+～+++2P年龄/岁0.1820.670 <50461729 ≥50341123FIGO分期10.486<0.001 Ⅰ～Ⅱ422517 Ⅲ～Ⅳ38929病理分级22.347<0.001 G125214 G2～G3551540淋巴结转移18.885<0.001 有25223 无553322

表4 Twist与正常子宫内膜和子宫内膜癌中临床病理特征的关系

分组例数-+～+++2P年龄/岁1.3430.247 <50461234 ≥50341321FIGO分期17.902<0.001 Ⅰ～Ⅱ42339 Ⅲ～Ⅳ381226病理分级9.6990.002 G125187 G2～G3551936淋巴结转移9.2530.002 有25322 无552629

2.3 子宫内膜癌中Cyclin E和Twist表达的相关性

通过采用列联系数分析显示，在子宫内膜癌中，Cyclin E和Twist的表达呈正相关(r=0.239，P=0.027)(表5)。

表5 Cyclin E和Twist在子宫内膜癌中表达的相关性分析

3 讨论

3.1 子宫内膜癌中Cyclin E表达的临床意义

Cyclin E是G1细胞周期素，其参与到细胞周期的进程，是细胞在G1期与S期转换过程中的主要限速因子，Cyclin E的过度表达能够缩短细胞的G1期，使细胞加速进入S期，引起中心体过度增殖，扰乱有丝分裂的正常进程，形成细胞的异常繁殖，从而诱发肿瘤的形成。本研究发现，Cyclin E的过度表达与子宫内膜癌的临床分期、病理分级、淋巴结转移具有相关性(P<0.05)，提示Cyclin E与子宫内膜癌的发展密切相关。蒋金芳等[4]指出，CyclinE的阳性表达与子宫内膜癌的组织学分级相关,Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级间差异有统计学意义(P<0.05)。吴红莲等[5]指出，CyclinE蛋白的高表达可能为宫颈组织恶变的生物学标志。韦毓等[6]研究表明，子宫内膜样癌中，Cyclin E蛋白的阳性率均明显高于正常子宫内膜组和子宫内膜增生组,同时Cyclin E阳性率随着病理分级的增高而升高。

3.2 Twist与子宫内膜癌的关系

Twist 基因是一种癌基因，其在肿瘤的侵袭过程中起着重要作用。目前研究[7]认为，Twist 基因能够使肿瘤细胞适应周围的基质环境，获得性的上皮特性，形成转移病灶，并且在转移病灶中，肿瘤细胞的增殖和转移能力较原发肿瘤更强，甚至会出现抵抗肿瘤药物的特性。Yang等[8]研究发现，子宫内膜癌中Twist表达率约为74%，在FIGO分期Ⅲ级肿瘤患者的阳性率明显高于Ⅰ、Ⅱ级患者，同时发现肿瘤浸润于深肌层的患者阳性率要高于浸润于浅肌层的患者，提示Twist的异常表达可能与子宫内膜癌的发生、发展具有相关性。陈芳等[9]指出，在子宫内膜样腺癌组织中的Twist阳性表达率约为55.2%，而在正常子宫内膜阳性表达率约4.3%，Twist表达率与肿瘤的FIGO分期、淋巴结转移和肌层浸润程度具有相关性，与本研究中Twist在子宫内膜癌组织中的表达与患者病理分级、临床分期、淋巴结转移具有相关性的结果相一致。

3.3 Cyclin E和Twist与子宫内膜癌的相关性

Cyclin E和Twist在子宫内膜癌中的阳性表达率均明显高于正常子宫内膜组织。本研究显示，Cyclin E和Twist在子宫内膜癌中的表达呈正相关(r=0.239，P=0.027)。肿瘤是细胞周期相关性疾病，Cyclin E作为细胞周期素，在肿瘤的发生、发展过程中起着重要的调控作用[10]，其过度表达可以使细胞周期缩短，细胞增殖加速。Twist可以增强肿瘤侵蚀性和细胞增殖及转移能力，Cyclin E表达增加，协同Twist表达增强，使得肿瘤细胞呈现无限增殖的倾向[11]，提示Cyclin E与Twist的高表达在子宫内膜癌的发生、发展中可能起到协同作用。

综上所述，本研究发现Cyclin E和Twist的高表达与子宫内膜癌的发生、发展、侵袭、分化的过程有着密切关系，这对子宫内膜癌的生物学行为评价、选择指导具体治疗方案以及对肿瘤转移侵袭机制的研究都具有重要意义。

[1]莫秋荣, 梁科庆, 农勤高, 等. 子宫内膜癌中c-Myc和cyclin E的表达及临床意义[J]. 临床肿瘤学杂志, 2013, 18(11): 986-989.

[2]Kyo S, Sakaguchi J, Ohno S,etal. High Twist expression is involved in infiltrative endometrial cancer and affects patient survival[J]. Hum Pathol, 2006, 37(4): 431-438.

[3]杨军, 康安静, 苏宝山, 等. 免疫组织化学检测结果判读进展[J]. 中华临床医师杂志(电子版), 2014, 8(20): 3699-3703.

[4]蒋金芳, 郑兴征, 李洪安, 等. 子宫内膜样癌组织中P53与CyclinE蛋白的表达及其临床意义[J]. 石河子大学学报(自然科学版), 2008, 26(3): 322-324.

[5]吴红莲, 吕杰强. Skp2、P27和CyclinE在宫颈癌组织中的表达及与临床病理特征的关系[J]. 中国现代医生, 2011, 49(35): 1-4.

[6]韦毓, 庞朗, 冯秀英. PTEN和cyclin E蛋白在子宫内膜癌组织中的表达[J]. 肿瘤防治研究, 2006, 33(6): 457-458.

[7]伍娇娇, 冯望德, 冯定庆. Twist与宫颈癌的研究进展[J]. 中国妇幼保健, 2015, 30(14): 2288-2290.

[8]Yang J, Mani S A, Weinberg R A. Exploring a new twist on tumor metastasis[J]. Cancer Res, 2006, 66(9): 4549-4552.

[9]陈芳, 刘文臻, 刘云香. 子宫内膜样腺癌组织Twist和HIF-1α及E-cadherin表达的临床意义[J]. 中华肿瘤防治杂志, 2015, 22(11): 858-862.

[10] 叶龙, 白杨, 李晓京, 等. Cyclin E与女性生殖系统肿瘤的相关性研究[J]. 中国妇幼保健, 2013, 28(4): 728-730.

[11] 蒋红果, 邵杨, 罗瑛. Twist1在肿瘤发生中的作用[J]. 中国生物化学与分子生物学报, 2015, 31(5): 440-447.

doi:10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.021

A Study on the Expression and Significance of Cyclin E and Twist in Endometrial Adenocarcinoma

WuHaiyan1,WangXiaoyan1,DengXiaoyang1,ZengJun2△.

1.TheFirstAffilatedHospitalofChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China; 2.ChengduMedicalCollege,Chengdu610500,China

Objective To detect the expressions of Cyclin E and Twist in endometrial carcinoma and investigate the relationship between Cyclin E and Twist in the development of endometrial carcinoma. Methods The expressions of Cyclin E and Twist in endometrial carcinoma were detected by the immunohistochemical method, and the percentage of positive cells and the intensity of staining were scored by the semi-quantitative method. Results The positive expression rate of Cyclin E in endometrial carcinoma (71.25%) was significantly higher than that in normal endometrium (6.00%) (P<0.001), and the positive expression rate of Twist in endometrial carcinoma (77.50%) was significantly higher than that in normal endometrium (10.00%) (P<0.001). The expressions of Cyclin E and Twist were positively correlated in endometrial carcinoma (P<0.05). Conclusion The expressions of Cyclin E and Twist are very high in endometrial carcinoma, and there is a certain correlation between the expressions of Cyclin E and Twist in the occurrence and development of endometrial cancer.

Endometrial adenocarcinoma; Cyclin E; Twist

10.3969/j.issn.1674-2257.2016.06.020

R737.33

A

http://www.cnki.net/kcms/detail/51.1705.R.20161027.1702.044.html

△通信作者：曾俊，E-mail：12671823@qq.com