李晶泉徐永平，2王熙涛李媛王丽丽，2李晓宇，2

（1. 大连理工大学生命科学与技术学院，大连 116024；2. 教育部动物性食品安全保障技术工程研究中心，大连 116620）

抗金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的原核表达及蛋白纯化

李晶泉1徐永平1，2王熙涛1李媛1王丽丽1，2李晓宇1，2

（1. 大连理工大学生命科学与技术学院，大连 116024；2. 教育部动物性食品安全保障技术工程研究中心，大连 116620）

旨在将来源于鸡的金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）进行原核诱导表达，获得有抗体活性的目的蛋白。构建含有目的抗体基因的重组质粒，将此质粒进行原核诱导表达并鉴定所获得蛋白的生物活性。结果显示，（1）成功构建了含有金黄色葡萄球菌单链抗体（scFv）的重组质粒pCold I-scFv，质粒成功转化到大肠杆菌表达菌株中；（2）经过诱导表达后，目的蛋白主要以包涵体的形式存在于沉淀中；（3）使用4 mol/L 尿素成功地将包涵体变性溶出；（4）通过柱层析法及透析法获得了纯化及复性效果较好的目的蛋白；（5）间接ELISA鉴定证实所获蛋白具有金黄色葡糖球菌抗体活性。通过质粒构建及原核诱导表达、包涵体溶出和复性等步骤，最终获得了有金黄色葡萄球菌抗体活性的目的蛋白。

可溶性表达；包涵体；蛋白纯化；蛋白复性；有活性的蛋白

金黄色葡萄球菌是人和动物的一种主要病原菌［1］，它能引起脓肿、脓疱病和乳腺炎等感染性疾病，也能引起肺炎、败血病和中毒性休克综合征等致死性疾病［2］。目前为止，对金黄色葡萄球菌感染的治疗主要以抗生素为主，但滥用抗生素导致耐药菌频现，禽畜产品中抗生素的残留也对食品安全和人体健康造成了严重威胁［3，4］。……