田慧 杨峰晨 卢泓宇 徐期 杨勇

（浙江海正药业股份有限公司，台州 318000）

谷胱甘肽合成酶系CLEAs的制备及应用

田慧 杨峰晨 卢泓宇 徐期 杨勇

（浙江海正药业股份有限公司，台州 318000）

为在谷胱甘肽合成工艺中降低成本，同时能够实现酶的可存储性、商品化性，将谷胱甘肽合成酶系经过合适的沉淀剂沉淀，戊二醛交联制备成共固定交联酶聚集体。通过优化沉淀条件，交联条件，蛋白浓度及添加剂的使用，最终得到最优的制备方法为：在4℃，30 g/L蛋白浓度条件下，加入PEI-600（添加剂w∶酶液蛋白w=1∶5）与酶液进行充分混合，然后加入60%饱和度硫酸铵沉淀4 h，最后以0.5%戊二醛进行交联。最终蛋白沉淀率为94.9%，酶活回收率为48.2%，单位CLEAs的酶活为4.9 U/g，分别相比对照组的28.7%及2.57 U/g提高了19.5%和2.33 U/g，GSH最高产量达到11.26 g/L，在转化第12批次时GSH产量为9.03 g/L，相对酶活力为78.4%，4℃条件下储藏33 d后相对酶活力为92.12%。经优化制备条件后得到的谷胱甘肽合成酶系CLEAs有较高的初始酶活力，能稳定转化10批次以上，储藏稳定性佳，具有优良的工业化前景。

谷胱甘肽合成酶系；固定化；交联酶聚集体；添加剂

谷胱甘肽（GSH）是一种含γ2谷氨酰基和巯基的生物活性三肽类化合物，在蛋白质和DNA的合成、氨基酸的转运、细胞的保护等重要的生物学现象中起着直接或间接作用。酶法合成谷胱甘肽是以L-谷氨酸、L-半胱氨酸、甘氨酸为底物，在谷氨酰半胱氨酸合成酶（酶A）、谷胱甘肽合成酶（酶B）、乙酰磷酸激酶的催化作用下合成。但在生产上未纯化过的游离酶的使用导致生产后期杂质较多，分离纯化工艺复杂，同时由于游离酶的一次性使用，导致生产成本居高不下。……