魏红岩， 孟晓卿， 黄志伟

(东华大学 化学化工与生物工程学院, 上海 201620)



酿酒酵母总蛋白的提取及其耐核苷类药物表达特性分析

魏红岩， 孟晓卿， 黄志伟

(东华大学 化学化工与生物工程学院, 上海 201620)

建立了一种简便适用于从真核细胞酿酒酵母菌中提取总蛋白的方法，应用该方法探索了两株对核苷类药物5-FC高耐受菌株的蛋白表达特性。实验中以细胞破碎率和总蛋白浓度为主要检测指标，对比分析了6种酵母细胞破碎方法，即液氮研磨、超声波破碎、酸洗玻璃珠法、酶法、反复冻融法、TNBIO高压细胞破碎，通过比色法测定了总蛋白的含量，发现改进后的酸洗玻璃珠法的细胞破碎率为81.25%，总蛋白含量152.67 mg/mL，效果明显优于其他几种方法. 实验表明,在裂解液中添加适量的PMSF等蛋白酶抑制剂，可以有效防止蛋白的降解。经过SDS-PAGE对核苷类药物高耐药性菌株酵母总蛋白表达特性分析，酸洗玻璃珠法提取的蛋白含量高，所含杂质少，条带比较多且清晰，其中相对分子质量约为21 kDa和43 kDa的蛋白有明显的表达差异，可能与菌株细胞的耐药性相关。

酿酒酵母； 细胞破碎； 蛋白质提取； 耐药性

0 引 言

酵母广泛应用于遗传和细胞生物学的研究，也是基因工程技术应用中十分重要的宿主菌[1]。由于酵母细胞具有坚硬的细胞壁，其厚度约为0.1～0.3 μm，当细胞老化时，厚度还会增加，难以破碎[2]，导致酵母细胞中的总蛋白的释放率不高。对酵母细胞进行破碎，是对细胞内物质提取和研究中的关键步骤，也是综合利用酵母的一种有效途径，在一定程度上决定着实验的成功与否及效率高低[3]。……