正交试验法优选清肺健中颗粒的提取工艺

2016-12-15成永明崔小敏石会丽王文骊刘军锋

陕西中医 2016年11期

关键词：清肺黄芩供试

成永明崔小敏雷琨石会丽王文骊刘军锋

陕西省渭南市食品药品检验所(渭南 714000)

·方药纵横·

正交试验法优选清肺健中颗粒的提取工艺

成永明崔小敏△雷琨△石会丽△王文骊▲刘军锋△

陕西省渭南市食品药品检验所(渭南 714000)

目的：优选清肺健中颗粒的水提取工艺。方法：通过正交试验考察加水量、提取时间和提取次数对清肺健中颗粒提取工艺的影响。以黄芩苷含量和干膏率考察指标，综合评分法优选最佳工艺条件，采用HPLC测定黄芩苷的含量，流动相甲醇-0.4%磷酸水溶液(47∶53)，检测波长280nm。结果：最佳提取工艺为加8倍量水，煎煮3次，每次1.5h。结论：优选的提取工艺稳定、简便可行，可用于清肺健中颗粒的提取生产。

概述清肺健中颗粒是由黄芩、太子参、桔梗、陈皮等10余味药材组成的复方制剂，具有宣肺平喘、清肺化痰、理中健脾的功效，临床用于慢性阻塞性肺病、支气管扩张、支气管哮喘、肺纤维化合并感染及肺癌等见上述症状者。方中黄芩为君药，具有清热燥湿，泻火解毒的功效，用于治疗肺热咳嗽、胃肠湿热等症[1]。黄芩苷是黄芩的主要药效成分，含量高达黄芩药材的9%以上，具有抗炎、抗菌、抗氧化、抗过敏等多种药理作用[2]。本文采用正交试验法[3-4]，以黄芩苷含量和干膏率为评价指标，采用综合评分法[5-7]来优选影响水煎提取工艺的最佳因素指标，以保证临床用药的有效性。

1 仪器与试药高效液相色谱仪(岛津LC-2010A型)，紫外-可见检测器(UV-VIS)，化学工作站(LC-Solution)，昆山市超声仪器有限公司的超声波清洗机(KQ-100型)、北京赛多利斯天平有限公司的电子分析天平(BT25S,d=0.01mg；BS210Sd=0.1mg)。乙腈为色谱纯试剂，水为重蒸水，其它试剂均为分析纯。试验用药材购自于西安盛兴中药饮片有限责任公司(符合《中国药典》2015版)。黄芩苷购自中国药品生物制品检定所(供含量测定用，批号：110715-201318，纯度93.30%)，使用前置干燥器中干燥至恒重。

2 方法与结果 2.1以预试验为基础，进行正交试验设计，考察因素为加水量、提取次数、提取时间，因素水平见表1。

2.2 干浸膏得率的测定方法每个试验号的样品溶液，精密量取100ml，于已干燥至恒重的150ml蒸发皿中，蒸干，105℃干燥3h，置干燥器中冷却至室温，迅速称重，计算干浸膏得率，结果见表2。

表1 试验因素水平表

2.3 测定黄芩苷含量 2.3.1 色谱条件与系统适应性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；色谱柱：Akasil-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；以甲醇-0.4%磷酸溶液(47∶53)为流动相；检测波长为280nm；柱温为30℃流速为每分钟1.0ml。理论塔板数按黄芩苷峰计算应不低于4000。

2.3.2 制备对照品溶液：精密称取黄芩苷对照品11.96mg，置50ml量瓶中，用甲醇溶液稀释制成含黄芩苷0.5579mg/ml的对照品储备液。精密吸取对照品储备液5ml，置于50ml量瓶中，用甲醇稀释制成含黄芩苷 0.0558mg/ml的对照品溶液，即得。

2.3.3 供试品溶液的制备：对各正交样品滤液精密量取1ml，于10ml量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，微孔滤膜(0.45μm)滤过，取其续滤液为供试品。

2.3.4 阴性对照溶液的制备：按拟定制剂工艺，制得黄芩阴性对照样品，按照“2.3.3”项制备法制得阴性对照溶液。

2.3.5 测定法:分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，记录色谱图，见图1。按外标法以峰面积计算含量，结果见表2。

2.3.6 方法学考察：分别精密吸取浓度为0.0558mg/ml黄芩苷对照品溶液2μl、4μl、8μl、12μl、16μl、20μl，注入液相色谱仪，记录色谱图，测定峰面积，以进样对照品溶液的浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标，进行线性回归，得方程Y=3414580×-37645，r=0.9999。线性范围0.1116～1.1160μg。精密度试验以黄芩苷峰面积值计算的RSD为 0.23%，表明仪器精密度良好；稳定性试验以0～12h内黄芩苷峰面积值计算的RSD为0.87%，表明供试品溶液在12h内稳定性较好；重复性试验测得黄芩苷含量的RSD为 0.62%，表明本方法重复性较好；加样回收率平均值为 100.61%，RSD为0.98%，回收率良好。

图1 对照品溶液(A)、供试品溶液(B)与阴性对照溶液(C)高效液相色谱图(1黄芩苷)

2.4 提取工艺优选选黄芩苷含量及干膏率的综合评分为指标，权重系数分别为50%，50%。综合评分=黄芩苷含量/黄芩苷含量最大值×50%+干膏率/干膏率最大值×50%，对水提条件进行优选。试验安排及结果见表2，方差分析见表3。固本清颗粒金水提取工艺过程中，不同的工艺参数会影响提取效果。以综合评分考察指标，A2>A3>A1，B3>B2>B1，C3>C2>C1，C因素(提取次数)影响最大，A因素(加水量)次之，B因素(煎煮时间)影响最小。方差分析结果见表8，结果表明，因素C有显著影响(P<0.05)，因素A和B对试验结果均无显著性影响(P>0.05)，兼顾能源的节约，以A2B2C3为佳，即最佳提取工艺为加水8倍量、煎煮3次、每次1.5h。

表2 固本清金颗粒水提L9(34)正交试验结果

表3 方差分析结果

2.5 验证试验称取处方量药材按优选的提取工艺进行试验，平行操作3份，分别测定黄芩苷含量和干膏率。计算结果接近或高于正交表中最优值，黄芩苷和干膏率基本稳定，黄芩苷含量分别为 6.670，6.816，6.725mg/g，干膏率分别26.03%，26.76%，26.37%，RSD分别为1.10% 和1.38%(n=3)，说明该工艺稳定、可行。

3 讨论试验结果表明，甲醇和乙醇作为提取溶剂时黄芩苷的峰面积差异不大，因此最终选择安全低毒的乙醇作为样品的提取溶剂。

黄芩苷含量测定色谱条件参考2015年版《中国药典》[1]黄芩项下相关条件，最终采用甲醇-0.4%磷酸(47∶53)为流动相时，黄芩苷分离度良好，峰形对称，阴性对照表明黄芩苷色谱峰不受其他成分干扰，方法专属性良好。

清肺健中颗粒在临床应用中多用汤剂，依据本处方剂量大，结合颗粒剂的特点，将其设计为颗粒制剂，对其水煎提取工艺，采用正交设计法进行优化，选择黄芩苷含量和干膏率进行综合评价，依据各工艺参数对制剂提取结果的影响，优选出的最佳参数，保证工艺稳定可行，可为清肺健中颗粒的生产奠定实验基础。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典 [S].北京：中国医药科技出版社，2015.

[2] 李英，吕晔，林丽萍. 黄芩的研究进展[J].海峡药学，2013，25(9)：6-13.

[3] 吕沐，钟凌云. 正交试验优选干姜的制备工艺[J].中国实验方剂学杂志，2015，21(15)：23-25.

[4] 潘涛，欧阳波，张西芝，等.正交法优选产康乐颗粒的水提工艺[J].中医药导报，2014，20(15)：30-32.

[5] 刘桂花，何承辉，帕依曼·亥米提，等.多指标综合评分法优选复方双金感冒颗粒的提取工艺[J].中国药房，2016，27(4)：510-513.

[6] 谢彬，于艳，王雪峰，等. 多指标综合评分法优选清肺通络膏提取工艺[J].中华中医药学刊，2016，34(2)：326-329.

[7] 殷明阳，刘素香，张铁军，等. 复方中药提取工艺研究概况[J].中草药，2015，46(21)：3279-3283.

(收稿2016-07-25；修回2016-08-17)

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