邸红芹 杨永辉 朱桂云 王晓玲 杨庆志 范海霞 王亮 张辉



·论著·

改良多重实时荧光定量PCR检测流感A型和B型病毒

邸红芹 杨永辉 朱桂云 王晓玲 杨庆志 范海霞 王亮 张辉

目的 建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法 根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT-PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果 成功建立了基于同源加尾系统和Taqman-分子灯标探针的改良多重实时荧光定量PCR检测体系；该方法最低检测限为102 copies/μl，特异性良好，重复性良好，变异系数(CV)为0.99%～2.50%。结论 建立了快速、敏感、特异、稳定地改良多重实时荧光定量PCR(MRT-PCR)检测体系，具有良好的临床应用前景。

多重实时荧光定量PCR；同源加尾系统，Taqman-分子灯标；流感病毒

流感病毒(influenza virus，IFV)为分节段(8个节段)的负链RNA病毒，其属于正粘病毒科(orthomyxoviridae)，基于流感病毒核壳蛋白(NP)和基质蛋白(M)抗原决定簇的差异，分为三种不同型：A型、B型和C型。其中A型流感病毒(influenza virus A，IFA)和B型流感病毒(influenza virus B，IFB)是引起人感染的主要病毒，其可导致上呼吸道感染且能迅速传播流行，特别是在老人和儿童等人群中发病率和死亡率较高[1]。传统的检测方法，如鸡胚组织培养接种以及血清学诊断，由于其操作过程繁琐、灵敏度低以及检测时间较长，无法满足快速诊断的要求，并且病毒抗原的变异频率很高、传播快速为IFV的精准诊断和有效防控带来极大困难。病毒简便、精确及敏感的诊断手段就表现得极其重要。……