连鹏

（辽宁省锦州市动物疫病预防控制中心121004）

锦州市猪O型口蹄疫免疫抗体水平调查

连鹏

（辽宁省锦州市动物疫病预防控制中心121004）

在2013～2015年，从锦州市各猪养殖场共采集了20567份血清，应用口蹄疫O型液相阻断ELISA实验方法，进行抗体监测，结果为2013～2015年养殖场整体抗体合格率86.48%，表明，锦州市本地养殖场猪口蹄疫抗体水平整体比较高，并有逐年上升的趋势。

猪O型口蹄疫；抗体；液相阻断ELISA；调查

口蹄疫是由口蹄疫病毒引起偶蹄兽的一种急性、热性、高度接触性传染病。该病的临诊特征是传播速度快、流行范围广，成年动物的口腔黏膜、蹄部和乳房等处皮肤发生水疱和溃烂，幼龄动物多因心肌炎使其死亡率升高。世界动物卫生组织将该病例为A类传染病之一，在我国也列为一类传染病，属于国家强制免疫项目。自1999年我国爆发第5次O型口蹄疫疫情以来，由于近年来贯彻实施以免疫预防为主的防治策略，各地均未出现猪O型口蹄疫的急性爆发和大面积流行情况，此病得到了有效控制。为了了解近3年来锦州市本地养殖场和外地调入锦州猪的猪O型口蹄疫抗体水平情况，在2013～2015年，从本地养殖场采集了20567份血清进行抗体监测，现将调查结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 待检血清

2013～2015年，从锦州市的5个县市区猪场采集的血清。

1.2 试剂

口蹄疫O型液相阻断ELISA抗体检测试剂盒，包括96孔酶标板、液体加样槽、U型96孔抗原抗体反应板、封板膜、口蹄疫O型病毒抗原、口蹄疫O型病毒兔抗血清、口蹄疫O型病毒豚鼠抗血清、兔抗豚鼠血清IgG-辣根过氧化物酶结合物、口蹄疫O型阳性对照血清、口蹄疫阴性对照血清、3%双氧水、PBST浓缩液、豚鼠抗血清稀释液、终止液、碳酸盐缓冲液胶囊、柠檬酸-磷酸盐缓冲液片剂、OPD片剂。购自中国农业科学院兰州兽医研究所。

1.3 检测方法

（1）包被：ELISA板每孔用50ul兔抗病毒血清包被，室温下置湿盒过夜。

（2）洗涤：用PBS液洗板5次。

（3）加被检血清，在另一酶标板中加入50ul被检血清 （每份血清重复做2次），2倍连续稀释起始为1：4。

（4）向稀释好的酶标板中加入抗原，每孔内加入相应的同型病毒抗原50ul，混合后置4℃过夜，或在37℃孵育1h，加入抗原后使血清的起始稀释度为1： 8。

（5）将50ul的血清/抗原混合物转移到兔血清包被的ELISA板中，置37℃孵育 1h。

（6） 洗板同 （2）。

（7）每孔滴加50ul前一步使用的同型病毒抗原的豚鼠抗血清，置37℃孵育1h。

附表 2013～2015年锦州市猪养殖场猪O型口蹄疫抗体水平监测结果

附图 2013～2015年锦州市猪O型口蹄疫抗体水平趋势图

（8）洗板：每孔加50ul酶结合物，置37℃孵育1h。

（9）再洗板每孔加50ul含0.05%过氧化氢 （3%质量浓度）的邻苯二胺。

（10）加50ul1.25mol/L硫酸终止反应，15min后，将板置于分光光度计上，在492nm波长条件下读取光吸收值。

1.4 判定标准

抗体滴度以50%终滴度表示，即该稀释度50%孔的抑制率大于抗原对照孔抑制率均数的50%。置37℃孵育1h。 ≥1： 64， 99%以上保护； ＜1： 4，不保护； 1： 4～1： 45， 50%保护。

2 结果

（1） 2013～2015年共监测本地猪养殖场1351个，20567份样品，抗体合格数17786份，抗体合格率86.48%，其中2013～2015年抗体合格率分别为86.62%，86.18%，86.63% （监测结果详见附表）。

（2）锦州市本地猪养殖场猪O型口蹄疫抗体水平趋势 （见附图）。

3 讨论

（1）本次调查结果表明，经过这几年实施猪O型口蹄疫强制免疫，本地养殖场猪O型口蹄疫抗体一直处于较高水平，都在70%以上，近3年相差不大，都维持在较高的抗体水平，易感动物长期处于有效的保护状态。

（2）虽然锦州地区猪O型口蹄疫抗体一直较高，但是由于是抽检，并不能完全客观的反应所有猪群的情况，绝大多数猪O型口蹄疫抗体保护率符合国家标准，但同时存在少部分在50%保护或不保护的状态，这点应引起重视，保证免疫抗体达到较高的均匀度至关重要。

（3）少部份不合格样品的原因可能有以下3点，一是与疫苗质量有关，国产疫苗在生产工艺上仍然存在很多问题，免疫期短，不能完全有效阻断病毒的感染复制，需要严把质量关。二是我国防疫体系还不健全，特别是基层，管理松散，村防疫员素质有待提高。三是免疫操作不规范，一些村防疫员不按照免疫程序操作，漏免，免疫剂量不够等情况时有发生，需要加大管理及检查力度，做到应免尽免。

总之，我国应继续实行以免疫为主的综合防治措施，切实改善疫苗质量，提高免疫效果，减少不良反应，共同把好免疫关、检测关，将防控工作做好。

连鹏 （1984.5-），男，辽宁省锦州市人，本科，兽医师，从事动物疫病监测、诊断、流行病学调查等工作。