聂瑞强，杨玉静，谢建山,2，范瑞文，许冬梅，于秀菊，段志成，董常生

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；2山西医科大学基础医学院，太原030001）

Pax6 PAI亚结构域在黑色素细胞中对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2的影响

聂瑞强1，杨玉静1，谢建山1,2，范瑞文1，许冬梅1，于秀菊1，段志成1，董常生1

（1山西农业大学动物科技学院，山西太谷030801；2山西医科大学基础医学院，太原030001）

【目的】高度保守的PAX转录因子家族在黑色素细胞的分化和黑色素的生成中起重要的作用，其家族共有的PD 结构域是其与下游基因结合的主要位点，而PD结构域氨基端的PAI亚结构域在其与下游基因的结合过程中发挥重要的作用。研究表明Pax6在视网膜上皮黑色素细胞的分化中发挥至关重要的作用，本试验借助研究Pax6 PAI亚结构域的功能来对PAX转录因子家族共有的PD结构域和PAI亚结构域进行研究。【方法】首先通过Psipred对Pax6 PD 结构域的结构进行分析，使用NCBI对Pax6 PD结构域与下游基因的结合位点进行分析，使用Jaspar对MITF、TYR、TYRP1和TYRP2启动子中Pax6 PD结构域可能的作用位点进行预测。使用普通PCR克隆Pax6 PAI亚结构域，将其连入T载体，酶切后连入慢病毒载体，并送公司测序确认。将构建好的PAI亚结构域过表达载体通过细胞转染导入到培养的小鼠黑色素细胞中，使其过量表达。收集细胞，分别通过观察绿色荧光蛋白检测转染效率，使用RT-PCR 和Western blot 来检测MITF 、TYR 、TYRP1和TYRP2在mRNA 和蛋白水平的变化，同时检测黑色素细胞中黑色素生成量的变化。【结果】通过NCBI分析可知，Pax6 PD结构域与下游基因的作用位点主要集中在氨基端的PAI 亚结构域。……