东惟玲 方琪 王达鹏 周赟 单青婷 惠国桢 单立冬

(苏州大学: 1附属第一医院神经内科; 2附属第一医院神经外科; 3基础医学部神经生物学教研室，江苏 苏州 215123)

·论著·

过表达A53T突变型α-synuclein细胞毒性及对损伤性刺激的影响

东惟玲1方琪1王达鹏1周赟1单青婷1惠国桢2单立冬3*

(苏州大学:1附属第一医院神经内科;2附属第一医院神经外科;3基础医学部神经生物学教研室，江苏 苏州 215123)

目的通过比较过表达A53T(Ala53Thr)突变型α-突触核蛋白(α- synuclein)的人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞与正常细胞的特性及对鱼藤酮引起细胞损伤的影响，探索α-synuclein在帕金森病发病机制中的作用，为寻找治疗药物潜在靶点提供依据。方法通过比较过表达A53T突变型α-synuclein的SH-SY5Y细胞与正常细胞的细胞形态及生长曲线观察突变型α-synuclein对细胞毒性的影响；用呼吸链抑制剂鱼藤酮刺激细胞，用3-(4，5-二甲基噻唑-2)-2，5-二苯基四氮唑溴盐(MTT)法观察细胞的存活率，免疫印迹法观察自噬相关蛋白的变化。结果正常细胞形态上接近于梭形，过表达A53T α-synuclein的细胞胞体变的肿胀，小的突起增多，甚至出现多种变异的形态；过表达A53Tα-synuclein 的细胞生长较正常细胞缓慢，培养相同时间达到的细胞总数相对较少；4 μM 鱼藤酮处理两种细胞，过表达A53Tα-synuclein 细胞损伤较正常细胞大，正常细胞随鱼藤酮处理时间的延长自噬相关蛋微管相关蛋白1轻链3 Ⅱ ( LC3-Ⅱ)的水平出现先下降后上升的趋势(Plt;0.05)，A53T细胞出现先上升后下降的趋势。结论过表达A53T突变型α-synuclein具有细胞毒性，且与正常细胞相比更容易受到损伤，可能与自噬敏感性增高，加速自噬耗竭相关。……