杨　烁，杨　敏，刘清玮，张　鑫

（吉林农业科技学院中药学院，吉林　吉林 132001）

超声波-酶法联合提取葛花总黄酮工艺研究*

杨烁，杨敏△，刘清玮，张鑫

（吉林农业科技学院中药学院，吉林吉林 132001）

为了研究葛花总黄酮最佳工艺，试验采用超声波-酶法联合提取葛花总黄酮，确定最佳的提取工艺条件。结果表明：葛花：料液比1：30，酶解时间为4.5h，酶解温度为50℃，酶浓度为1.2%。超声时间80min，温度80℃，液料比1：30，乙醇浓度70%。在最优条件下，提取率为4.307%。优选提取工艺简单可行，速度快，可提高葛花人参中有效成分的收率。

葛花；超声波；纤维素酶解；提取工艺

葛花为豆科植物葛Puerarialobata（Willd.）Ohwi的干燥花，是一种名贵的中药材。用于饮酒过度，头痛，头昏，烦渴，胸膈饱胀，呕吐酸水等伤及胃气之症［1］。现代药理表明［2］，葛花总黄酮还有收缩和保护胃肠黏膜，抑制乙醇在消化道的吸收，加强乙醇在胃肠道的首过效应，阻碍乙醇快速并且大量地进入血液循环，降低血液中乙醇浓度。戴雨霖［2］实验表明，无论酒前还是酒后给小鼠灌胃葛花提取液，都可以有效减少小鼠醉酒情况，降低小鼠死亡率。

本试验采用超声波-酶法联合提取的技术，以葛花总黄酮含量为主要考察指标，采用正交试验法探讨了不同提取条件对总黄酮的影响，为葛花的开发利用提供理论基础，以充分利用我国的物质资源。

1　试验材料

葛花，2015年购于吉林大药房；

芦丁标准品 （宁夏和氏璧生物科技有限公司）；纤维素酶（HJ0721SB14，上海源叶生物科技有限公司）；冰醋酸 （天津政成化学制品有限公司）；香草醛 （香兰素）（天津政成化学制品有限公司）；硫酸（天津政成化学制品有限公司）；亚硝酸钠（天津政成化学制品有限公司）；硝酸铝（天津政成化学制品有限公司）；氢氧化钠（天津政成化学制品有限公司）；无水乙醇 （沈阳市新化试剂厂）；甲醇（天津福晨化学试剂有限公司）；蒸馏水等均为分析纯。

2　葛花试验方法

2.1葛花样品制备

取葛花药材适量，粉碎，过100目筛，在100℃的条件下，烘干至恒重，两次称量之差要小于0.03g，备用。

2.2单因素试验

精确称量0.25g葛花粉末，按照一定的液料比，酶解时间，温度，酶浓度进行酶解反应。酶解反应后，进行抽滤，残渣放烘箱中于100℃烘干。再按照超声时间80min，温度80℃，液料比1：30，乙醇浓度70%进行超声［3］。超声后抽滤，将两次的滤液合并，离心（4000r/min，10min），称量体积，并定容在50mL容量瓶中［4］。精密量取1mL于10mL容量瓶中，按照2.2所示方法在506nm处测吸光度。

2.2.1料液比的选择

称量葛花粉末0.25g，共4份，按照料液比1：10、1：20、1：30、1：40的比例进行添加，比较不同料液比对葛花总黄酮提取效果的影响。

2.2.2酶解时间的选择

称量葛花粉末0.25g，共4份，分别提取2h，3h，4h，5h比较不同时间对葛花总黄酮提取效果的影响。

2.2.3酶解温度的选择

称量葛花粉末0.25g，共4份，在35℃，40℃，45℃，50℃条件下进行提取，比较不同温度对葛花总黄酮提取效果的影响。

2.2.4酶浓度的选择

称量葛花粉末0.25g，共4份，在0.6%，0.8%，1%，1.2%条件下进行提取，比较不同酶浓度对葛花提取率的影响。

2.3葛花总黄酮提取正交试验

在单因素实验基础上，将酶解时间、酶解温度、酶浓度3个因素作为考察的对象，并设计正交表L9（34），考察这3个因素对超声波-酶法联合提取对总黄酮含量的影响，确定最佳提取工艺条件。

3　结果与分析

3.1葛花总黄酮提取最佳工艺的确定

3.1.1标准曲线的制作

以总黄酮溶液的浓度（μg/mL）为横坐标，提取率为纵坐标，得到标准曲线，试验结果表明，芦丁在0.01～0.05μg/mL范围线性良好，回归方程为：y= 25.18x-0.0024，R2=0.99939。

3.1.2单因素试验结果

（1）提取时间：提取率在3-4h增长快速，4-5h后，增长缓慢，最佳的提取时间为5h，如图1所示。

图1　酶解时间对葛花总黄酮提取率的影响

（2）提取温度：温度为35℃时提取率最低，随着温度的增加提取率不断增大，当温度在45℃后，增长缓慢。最佳温度为50℃，如图2所示。

图2　酶解温度对葛花提取率的影响

（3）酶浓度：随着酶浓度的增加，提取率呈现逐渐增长的趋势。当酶浓度在1.2%时，提取率最大，故最佳酶浓度为1.2%，如图3所示。

图3　酶浓度对葛花提取率的影响

（4）料液比：根据实验结果判定最佳料液比为1：40。料液比大约1：30后，实验结果几乎持平，如图4所示。

图4　料液比对葛花提取率的影响

由表1所知，F＜F0.05（3，7）=4.35，则P＞0.05，故在0.05显著水平上接受H0，说明料液比对葛花总黄酮的提取率没有有显著的影响。结合经济效益等综合因素，料液比最后选为1：30。

表1　料液比单因素方差分析表

3.1.3正交实验结果

按照表2进行正交试验，比较各因素不同水平对葛花总黄酮提取率的影响。

表2　葛花总黄酮正交实验表

从表3的实验结果分析可知，影响顺序由高到低为：酶浓度＞酶解温度＞酶解时间，最优方案为A3B3C3，即酶解时间为5.0h，酶解温度为55℃，酶浓度为1.2%。

表3　正交实验结果与分析

3.2方差分析结果

酶浓度为显著项，其他因素不显著。即除酶浓度外的其他因素对该实验的提取率影响不明显。因此考虑到经济等综合条件，最佳提取工艺为：酶解时间为4.5h，酶解温度为50℃，酶浓度为1.2%。

4　结论

本文利用超声波-酶法联合技术提取葛花中总黄酮，经单因素和正交试验得出最佳提取工艺分别为：葛花：料液比1：30，酶解时间为4.5h，酶解温度为50℃，酶浓度为1.2%。在最优条件下，提取率为4.307%。葛花中的黄酮具有氧化还原作用，加速乙醇氧化，氧化的乙醇失去毒性。本文的提取工艺操作简单，有效率高。此实验为葛花人参解酒颗粒剂的制备奠定了基础。

［1］ 朱华，刘芯蕊，王孝勋.葛花的研究进展［J］.中医药学刊，2005，23（12）：2273-2274.

［2］ 戴雨霖.葛花人参解酒护肝机制的研究［D］.2014，5.

［3］ 朱中贵，张卓勇，蔡光明.葛花总黄酮提取工艺及抗氧化活性研究［J］.中南药学，2009，3（7）：203-205.

［4］ 李甜甜，傅舒，刘晓风，李东，王舒雅，郑涛.酶法结合超声提取粉葛根葛根素的研究［J］.食品工业科技，2015（13）：175-179.

TQ351.3

吉林农业科技学院省级大学生创新资助项目，合同号：吉农院合字［2015］第005号。

△杨敏（1984～），女，吉林省吉林市人，吉林农业科技学院中药学院教师，硕士。