王林德

（甘肃省武威市林业综合服务中心，甘肃　武威　733000）

黑美人葡萄组培育苗技术研究

王林德

（甘肃省武威市林业综合服务中心，甘肃武威733000）

通过对黑美人葡萄组培外植体选择、灭菌、启动分化、初代、继代、生根培养基进行对比筛选研究，以期建立黑美人的再生体系。结果表明：1/2MS培养基附加6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L、6-BA0.05mg/L+IAA1.0mg/L、IBA1.0mg/L+活性炭0.2mg/L对茎段腋芽萌发、继代繁殖、生根培养的效果较好；继代繁殖周期在25d较为适宜；河沙：腐殖质=1：1的基质，移栽成活率达92%。

黑美人葡萄；茎段；组织培养

“黑美人”是由“美人指”实生选育而成的优质中晚熟葡萄新品种。该品种果穗长圆锥形，果粒着生紧凑，大小整齐，平均穗重850～980g，平均粒重9.5g，最大粒重13g。果粒长椭圆形，蓝黑色，果粉厚，果皮薄，果肉较软，可溶性固形物含量18%～19.5%。“黑美人”遗传性状稳定，植株生长势强，稳产高产，着色好，易管理。而且果实成熟后留树时间长，适宜温室栽培，具有良好的推广应用前景［1］。本研究对黑美人葡萄组培中的样品采集处理、培养基选择、优化及炼苗移栽进行研究总结，确定了技术关键，为我市葡萄产业发展提供了优良品种。

1　供试材料

供试材料取自武威市林业综合服务中心2012年引进，并收集保存于武威市林木良种繁育中心葡萄品种园中的黑美人葡萄。

2　试验方法

2.1样品的采集及处理

采集当年生枝条距离顶部约4～8cm并带有2～4个节位芽的嫩枝，剪去叶片，用无菌水冲洗后，在超净工作台内按以下步骤操作：0.1%升汞液消毒3～5min；无菌水漂洗5次后用灭菌滤纸吸干水分；切成1.0～2.0cm长单芽茎段，接种于培养基上；接种后置于2支40瓦日光灯下（光强约2500Ix）进行茎段萌芽诱导、继代繁殖、生根培养，每天光照9±1h，温度25～30℃。

2.2培养基选择

离体萌芽诱导、继代繁殖、生根3类培养基均加入蔗糖3%，琼脂0.4%，pH值为5.8。其中，离体萌芽诱导培养采用MS、1/2MS、GS三种培养基，并分别附加植物生长调节剂6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L和6-BA1.0mg/L+NAA0.1mg/L2组配比，进行茎段腋芽诱导发芽对比试验。继代繁殖培养采用MS、1/ 2MS两种培养基分别附加 6-BA0.02～0.1mg/L+ IAA0.5～2.0mg/L，定期观察小苗节位生长速度。生根培养基采用 MS、1/2MS两种培养基，分别附加IBA1.0mg/L+NAA0.2mg/L、IBA1.0mg/L+活 性 炭0.2mg/L和IBA0.5～1.0mg/L+IAA0.01mg/L。

2.3培养基优化

将清洗消毒处理后的外植体剪为1.0～1.5cm带芽茎段接种于（MS+6-BA1.0mg/1+NAA0.2mg/1，0.7%琼脂粉，pH5.8～6.0）基本培养基中。研究3%蔗糖与白砂糖、蒸馏水与自来水配置培养基对外植体诱导的影响。每个处理3个重复，每个重复接种50个外植体，培养温度为（25±2）℃，光照强度2500lx，光照时间10h/d。30d后统计腋芽诱导率。

2.4组培苗炼苗、移栽及定植

组培苗生根、炼苗后，在装有自动喷雾保湿装置的塑料大棚内，移栽于各种不同基质的穴盘内，成活后出圃定植。

3　结果与分析

3.1不同种类培养基对茎段腋芽萌发的影响

MS、1/2MS、GS三种培养基附加植物生长调节剂对葡萄腋芽萌发诱导培养结果表明：1/2MS培养基茎段腋芽萌发率最高，MS、GS培养基次之。其萌发率分别为32.0%、33.3%和28.7%。但在附加NAA配比的培养基上，接种1周后茎段外植体生长良好、饱满，随后迅速膨胀肿大，形成愈伤组织块，明显抑制茎段腋芽的萌发，三种培养基萌发率均＜5%。表明该品种对NAA较为敏感，与已有的研究报道［2］基本类似。因此，本品种诱导培养以1/2MS培养基附加6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L为宜，见表1。

3.2不同种类培养基对继代繁殖的影响

表1　不同培养基茎段腋芽萌发率%

将离体诱导萌发的幼芽，切成带有腋芽和叶片的小芽段，插在不同的培养基上繁殖，25d、30d、35d节位抽生数见表2。结果表明：附加6-BA0.05mg/L+ IAA1.0mg/L在1/2MS培养基上生长的小芽，25d内可生长3个以上的节位，可满足组培快繁要求的繁殖系数。35d后节位抽生速度相对降低。

表2　不同培养基对继代繁殖的影响

3.3不同碳源和水对腋芽增殖的影响

组织培养需要大量配制培养基，除去蔗糖、琼脂等的消耗外，以蒸馏水消耗最大，一般使用为二重蒸馏水。自来水与二重蒸馏水微量元素与金属离子相差极大，同样蔗糖与白砂糖成本也相差较大。在有些植物增殖培养阶段，可用白砂糖代替蔗糖，用自来水代替蒸馏水［3］。在有些植物的组织培养中，也可以将自来水煮沸以降低其中Ca2+、Mg2+等离子浓度，从而用自来水代替蒸馏水［4］。但也有相关研究者表示怀疑。为了在研究中加以验证，在上述增殖和生根试验的基础上，用白砂糖代替蔗糖，用煮沸的自来水代替蒸馏水，分别研究其对增殖的影响（见表3）。

表3　不同碳源和水对金叶锦带腋芽增殖的影响

由表3可知，蔗糖和白砂糖对腋芽的出芽率影响无显著差异，表明蔗糖和白砂糖均可用于黑美人葡萄腋芽的快繁培养，在产业化生产中，可以用白砂糖替代蔗糖。煮沸的自来水对新生芽诱导率显著降低，表明水质对其的快繁影响较大。因此，在黑美人葡萄组培生产中，不能使用自来水代替蒸馏水。

3.4不同植物生长调节剂对生根的影响

由表4可以看出：所有参试的植物生长调节剂均能促使植株生根。附加IBA1.0mg/L+BA0.01mg/L的培养基生根效果较佳。附加NAA的培养基，植株根部愈伤组织产生率高达16%，严重的可阻止根系生长，影响移植成活率。

表4　不同植物生长调节剂对生根的影响

3.5不同基质对组培苗移栽成活率的影响

组培苗生根后，先置于2500～3000lx自然散射光下炼苗20～30d；在装有自动喷雾装置的塑料大棚内，移植于各种不同基质的穴盘内对比试验，光照强度从弱逐渐增强，控制在约2500～3000lx之间，湿度在90%以上。移植成活后移入营养杯，30d小苗老熟后出圃定植。移栽基质最佳配比为：河沙：腐殖质1：1，成活率高达92%。

4　讨论与结论

本研究结果表明，使用1/2MS培养基附加6-BA1.0mg/L+IAA0.1mg/L、6-BA0.05mg/L+IAA1.0mg/ L、IBA1.0mg/L+活性炭0.2mg/L对茎段腋芽萌发、继代繁殖、生根培养均有较好的效果。继代繁殖周期在25d较为适宜，繁殖系数达1：3以上，可满足组培快繁的要求。使用河沙：腐殖质=1：1的基质，移栽成活率高达92%。对该品种开展组培快繁，应用于规模化生产，从条件和技术操作上是可行的。

本试验使用含有NAA的培养基时，植株极易产生愈伤组织，茎段腋芽萌发无效。如何把握NAA的用量和使用方法以及探索更有效的组培配方，解决植株玻璃化和愈伤组织产生现象等问题有待于进一步研究。

［1］ 赵占春，徐卫东，孙素芬，等.葡萄新品种“黑美人”的选育及其栽培技术要点［J］.中国南方果树，2015，44（4）：125-127.

［2］ 邹瑜，牟海飞，吴代东，等.野生毛葡萄两性花优良株系种苗繁育技术研究［J］.中国南方果树，2011，40（3）：76-78.

［3］ 闫爱玲，徐海英，张国军.香妃葡萄的简化组培快繁［J］.落叶果树，2006，38（2）：8-9.

［4］ 陈佰鸿，张军拾.自来水的软化处理在葡萄组织培养中的应用［J］.甘肃农业大学学报，2002.3（37）：290-294.

S722.8