潘 懿

（百色市动物疫病预防控制中心，广西 百色 533300）

不同离心力分离动物血清对抗体效价检测结果的影响

潘 懿

（百色市动物疫病预防控制中心，广西 百色 533300）

为探不同离心力（转速）对抗体效价检测结果的影响，文章中以检测鸡新城疫抗体效价为验证试验，用100份鸡血液经不同离心力分离血清开展检测，结果表明抗体效价检测结果和离心力（转速）相关性不大，不同离心力分离动物血清对抗体效价检测结果影响不显著。

离心力；血清；抗体效价；相关性；显著

动物血清的质量好坏直接影响实验室抗体效价检测结果。目前分离血清常用的方法有两种，第一种是自然析出法，即将采集血液样品静置自然环境中，让其凝固后自然析出血清；第二种方法是离心法，借助离心机的离心力在血液凝固后离心分离出血清。在实际工作中因时间、工作环境所限，通常使用第二种方法分离血清。该方法省时省力，血清感观质量好，但对实验室抗体效价检测结果是否有影响未知。为了保证实验室抗体效价检测结果的科学性、准确性，笔者以检测鸡新城疫抗体效价开展验证试验，探讨不同离心力分离的血清抗体效价检测结果的影响。

1 实验材料和方法

1.1 实验设备、材料与试剂

高速离心机（珠海黑马医学有限公司 TGL-16R型）。新城疫抗原（北京海淀中海动物保健科技公司，批号：201503，有效期至：2015.11.03）。鸡1%红血球：采集 SPF鸡血全加20倍PBS液2000rpm离心5min，异去上清液，反复洗5次，第6次2500rpm离心10min，异去上清液，吸1ml红血球移加到99ml PBS液。

1.2 血清的采集和处理

准备10只经鸡新城疫免疫后30日的鸡，编号分别为A-J。每只鸡采集10ml 全血，分成10等份，每份1ml，分别编号为A1-A10；第2只鸡血液编号分别为B1-B10，如此类推，共分成100份鸡全血。每只鸡第1管全血编号分别为A1、B1....JI采用自然析出法分离血清，其余管的血液用不同离心力离心（0～15010g）5min分离血清，分离所得血清透明清亮、无污染。

1.3 检测方法

按《新城疫血凝和血凝抑制试验》GB/T16550-2008［1］开展检测。结果判定：在对照、阴、阳性都成立的情况下，将血凝抑制板倾斜45°，以完全流泪最大稀释度为该血清的血凝抑制滴度。

1.4 数据处理方法

（1）用离心力与转速换算公式计算出离心力，公式：离心力RCF=0.00001118×R ×N2RCF表示离心力，单位：xg；R 表示离心机半径，单位：cm；N表示转速，单位：转/分钟单位：rpm

（2）检测结果数据使用配对设计两样品平均数的差异显著性检验［2］

2 结果与分析

（1）检测结果

阴性、阳性对照都成立。100份全血用不同离力（0～11028g）分离所得血清经新城疫血凝抑制试验检测抗体效价，每份样品检测两次取平均值，检测结果见表1。

表1 新城疫血凝抑制试验抗体效价检测结果单位：log2

（2）检测结果数据使用配对设计两样品平均数的差异显著性检验｜t｜结果，见表2。

表2 配对设计两样品平均数的差异显著性检验｜t｜结果

（3）本次检测阴、阳对照成立。同份血清经新城疫血凝和血凝抑制试验平行检测两次，抗体效价检测结果部分存在微小波动，波动范围在一个滴度内，符合血凝和血凝抑制试验检测要求。

（4）试验设计离心力和转速跨度大。从表1来看，血清组A1-J1离心力及转速匀是0，A2-J2组离心力306xg，转速2000rpm，A10-J10组离心力达11028xg，转速高达12000rpm，A10-J10组离心力是A2-J2的36倍，转速是6倍。

（5）检测结果运用配对设计两样品平均数的差异显著性检验结果差异不显著。血清按离心力（转速）小到大（慢到快）分成10个组（A1-J1....A10-J10），运用配对设计两样品平均数的差异显著性检验计算出各组之间｜t｜值。查临界t0.05（9）=2.262，从表2的计算结果可以看出表中全部的｜t｜＜2.262，P＞0.05，表明同只鸡的血液经不同离心力分离出来的血清抗体效价检测结果差异不显著，不同离心力对血清抗体效价检测结果影响不大。

（6）离心力的大小不直接影响到抗体效价检测结果。有人认为在有离心机血清分离过程中，离心力（转速）越大（越快），抗体成分在离心力作用下沉降速度越快，导致检测结果抗体效价变低，离心力（转速）与抗体效价呈负相关。经过本次对鸡新城疫抗体效价检测的验证试验，结果表明鸡血清中的抗体效价并没有因离心力（转速）的改变而改变，抗体效价检测结果和离心力（转速）相关性不明显。

（7）本次验证试验每份样品匀开展平行检测。为了使本次验证试验数据更加科学、客观、准确，每份样品进行了平行检测，尽量减少实验操作误差。

［1］ GB/T16550-2008.新城疫检疫技术规范（血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验）［S］.北京：中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，2008.

［2］ 明道绪，王钦德，耿社民，等.生物统计附试验设计［M］.北京：中国农业出版社，2001：75-89.

The test results of different centrifugal force to separate animal serum antibody titer

To explore the result of influence of different centrifugal force （speed） against the titer detection， the test to detect NDV antibody titer .using the100 chicken blood by different centrifugal force to separate serum carry out inspection. The results showed that antibody titer has little relevance with the centrifugal force （speed）， the result of influence of different centrifugal force to separate of animal serum on the antibody titer is not significant.

Centrifugal force； blood serum； antibody titer； relativity； conspicuousness

S851

A

1008-1151（2016）01-0088-02

2015-12-11

潘懿（1974-），男，广西田林人，百色市动物疫病预防控制中心高级兽医师。