冯珊珊，杨　博，刘爱琴，武　婧，翟惠虹

(宁夏医科大学总医院：1. 外科学研究室；2. 消化内科，宁夏银川　750004)



◇技术方法研究◇

S100A6siRNA的构建及鉴定

冯珊珊1，杨博2，刘爱琴2，武婧2，翟惠虹2

(宁夏医科大学总医院：1. 外科学研究室；2. 消化内科，宁夏银川750004)

目的利用小片段干扰RNA(smallinterferingRNA,siRNA)抑制S100A6蛋白的表达，为研究CacyBP/SIP核转位机制提供有利的工具。方法设计S100A6的siRNA序列，用脂质体LipofectamineTM2000将siRNA转染至人结肠癌SW480细胞中，在荧光显微镜下观察转染效率，用Real-timePCR及Westernblot方法检测S100A6在人结肠癌SW480细胞内的mRNA和蛋白表达。结果构建了3对S100A6-siRNA，荧光显微镜下检测转染人结肠癌SW480细胞成功；RT-PCR证明了在SW480细胞内S100A6的mRNA表达显著降低(P<0.05)；Westernblot证明了SW480细胞内S100A6蛋白表达显著降低(P<0.05)；与S100A6si-1、S100A6si-3组相比，S100A6si-2组对S100A6的mRNA和蛋白抑制效果最明显(P<0.05)。结论成功构建了S100A6-siRNA，为CacyBP/SIP核转位机制研究提供了有利的工具。

结肠癌；S100A6；siRNA；钙周期素结合蛋白

钙周期素结合蛋白[calcyclin(S100A6)-binding-protein,CacyBP]是1998年从小鼠艾氏腹水瘤细胞中发现的以钙依赖方式结合S100A6的蛋白[1]；2001年发现一种人Siah-1结合蛋白(Siah-1interactingprotein,SIP)与CacyBP序列相同，从此命名为CacyBP/SIP[2]。本课题组前期研究发现，钙周期素结合蛋白(CacyBP/SIP)在结肠癌组织及结肠癌SW480细胞中高表达[3-4]。研究还发现，在结肠癌细胞中，CacyBP/SIP在细胞质表达，给予胃泌素[4-5]、表皮生长因子[6]、前列腺素E2[7]、缺氧[8]刺激后，CacyBP/SIP转位于细胞核。进一步研究发现，CacyBP/SIP核转位促进了结肠癌细胞的增殖[4]，且CacyBP/SIP核转位后可能与核内的细胞周期调控因子结合[9]。细胞核是细胞的代谢、生长、分化及遗传物质的调控中心。因此，CacyBP/SIP核转位可能与结肠癌的发生发展有关，但CacyBP/SIP的核转位机制尚不明确。根据CacyBP/SIP结构分析，CacyBP/SIP通过Ca2+可以结合S100蛋白家族中的S100A1、S100A6、S100B、S100P[10]。我们前期实验发现，S100A6可能导致CacyBP/SIP发生依赖Ca2+浓度方式的核转位。因此，本研究通过S100A6-siRNA的构建及鉴定，为CacyBP/SIP的核转位机制研究提供有利的工具。……