冯小慧 ，李国银 ，宋 洁 ，邵 海

［1.农业部农产品质量安全监督检验测试中心（呼和浩特），内蒙古 呼和浩特 010031；2.内蒙古自治区农牧业科学院资源环境与检测技术研究所，内蒙古 呼和浩特 010031；3.赤峰市农畜产品质量安全管理站，内蒙古 赤峰 024000］

高效液相色谱法测定亚麻籽中木酚素的含量

冯小慧1，2，李国银1，2，宋 洁1，2，邵 海3

［1.农业部农产品质量安全监督检验测试中心（呼和浩特），内蒙古 呼和浩特 010031；2.内蒙古自治区农牧业科学院资源环境与检测技术研究所，内蒙古 呼和浩特 010031；3.赤峰市农畜产品质量安全管理站，内蒙古 赤峰 024000］

［目的］建立高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）测定亚麻籽中木酚素的含量。［方法］采用液—液萃取法提取样品，以木酚素标准品进行定量，利用Agilent C18Sym 250 mm×4.6 mm色谱柱，以甲醇水溶液（甲醇∶水=4∶6）为流动相，采用紫外检测器（波长为290 nm）检测。通过加标回收和精密度试验，进行方法学验证。［结果］亚麻籽中木酚素回收率为95%～108%，精密度RSD为7.43%。不同实验室复核检测木酚素含量接近，重复性好。［结论］该方法可用于测定亚麻籽中木酚素的含量，为木酚素的工业化提纯提供了可靠的试验基础。

亚麻籽；木酚素；高效液相色谱；测定

亚麻籽中含有丰富的木酚素，木酚素具有非常高的抗氧化活性，是公认的抗癌物质［1］，具有抗癌［2］、抗真菌和抗过敏性疾病的功能。木酚素是一种植物雌激素［3］，可以延缓女性的更年期，也可以缓解更年期症状，可以预防乳腺癌、前列腺癌［4］和结肠癌［5］。亚麻是地球上木酚素含量最高的植物，其木酚素含量是其他植物的800倍，号称木酚素之王。木酚素主要存在于亚麻的种皮中［6-8］，提纯木酚素可以提高亚麻籽的附加值。为了实现亚麻籽中木酚素含量的准确检测，该试验建立了亚麻籽中木酚素含量测定的高效液相色谱法，优选了液相色谱条件。

1 仪器、材料和试剂

1.1 仪器 高效液相色谱仪：配有紫外检测器（波长为 290 nm）；电子天平：感量 0.1 mg和 0.01 g；高速离心机：配50 mL离心管；旋转蒸发器：配250 mL茄型瓶；样品研磨机；加热回流提取装置：配250 mL三角瓶；恒温水浴振荡器；自然对流烘箱；备有变色硅胶的干燥器；索氏提取器。

1.2 材料 样品：亚麻籽，由农业部农产品质量安全监督检验测试中心实验室保存。标准品：上海源叶生物科技有限公司生产，纯度≥98%，色谱级。

1.3 试剂 无水乙醚。无水乙醇。60%乙醇溶液。1.8 mol/L氢氧化钠溶液。盐酸溶液。甲醇，色谱纯。去离子水。 甲醇水溶液∶甲醇∶水=4∶6。

2 方法

2.1 样品前处理 准确称取样品1.00 g（精确至0.01 g）于滤纸筒（直径 2 cm，高约 7.5 cm）内，置于索氏提取器中，用无水乙醚浸泡12 h后，再用索氏提取器加热回流提取8 h，取出样品（连同滤纸筒），在室温通风条件下放置5 h，在（105±5）℃下烘2 h，取出，放入干燥器中，冷却至室温。打开滤纸筒，将样品置于250 mL三角瓶中，加入15 mL 60%乙醇溶液，在50℃条件下回流提取4 h。将提取液和残渣转入离心管中，以6 000 r/min离心10 min，取上清液，向残渣中加入15 mL 60%乙醇溶液；重复上述操作1次，合并上清液，待净化处理。

图1 木酚素标准品标准曲线

图2 木酚素标准品色谱图

图3 测定样品色谱图

表1 回收率和精密度检测（n=6）

表2 不同实验室HPLC检测木酚素的含量 g/100 g

向提取液中加入10 mL 1.8 mol/L氢氧化钠溶液，在40℃条件下振荡碱解40 min。用盐酸溶液调pH值至4～6，过滤，将滤液移入茄型瓶中，45℃真空浓缩至近干。用甲醇水溶液溶解并定容至200 mL，摇匀，过膜，待上机分析。

2.2 标准曲线的制备 准确称取木酚素标准品15.0 mg，用甲醇溶解并转移至10 mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，得浓度为1 500.0 μg/mL的木酚素标准储备液，于-20℃条件下储存，备用。

木酚素标准工作溶液：使用前，将储备液用甲醇水溶液稀释， 工作曲线溶度为 10、25、50、75、100、120 μg/mL，上机备用。

2.3 高效液相色谱定量色谱条件 色谱柱：C18Sym Agilent 250 mm×4.6 mm；流动相：甲醇∶水=4∶6；流速：1.0 mL/min；波长：290 nm；柱箱温度：35℃；进样量：20 μL。

3 结果与分析

3.1 标准曲线 配制不同浓度的木酚素标准溶液，以HPLC测定其峰面积。木酚素浓度与峰面积的关系为y=3.53x-1.96，相关系数r=0.9999（见图1）。 结果表明木酚素在1.54～308.00 μg/mL范围内线性良好。

3.2 试验方法的加标回收和精密度试验 在样本中添加不同浓度的木酚素标准品，进行回收率和精密度试验。结果显示（见表1），不同水平的木酚素各组分的平均回收率为95%～108%，相对标准偏差RSD为7.43%。

3.3 样品含量测定 按照2.1中的方法对轮选3号、Y-0310、9925-7-4-3-2、9910-10、2000-16、同亚12号和99-42共6种亚麻籽进行样品前处理，采用HPLC法检测6种亚麻籽中木酚素含量的测定。结果见图2、图3和表2、表3。由图2和图3可知，检测样本与木酚素标准品的保留时间一致，峰形较好。

表3 HPLC检测6种亚麻籽中木酚素的含量 g/100 g

将该实验室检测样本送至4家实验室进行方法复核检测。由表2可知，复核实验室检测木酚素含量（平均值）与该实验检测参考值接近，说明检测方法在不同的实验室重复性较好。

由表3可知，6种亚麻籽提取物木酚素含量与上海复核单位检测结果接近，说明该实验室建立的HPLC检测6种亚麻籽中木酚素含量的方法准确、有效。

4 结论与讨论

该研究通过无水乙醚脱脂、无水乙醇提取、C18色谱柱分离、HPLC法检测亚麻籽中木酚素，检测方法准确、快速，回收率高，线性好。该试验建立的利用高效液相色谱法 （high performance liquid chromatography，HPLC）测定亚麻籽中木酚素的含量的方法便于实验室进行样品检测，为木酚素的工业化提供了可靠的依据。

［1］邵文捷，冯小慧，姚一萍，等.亚麻木酚素提取方法的初步研究［J］.内蒙古农业科技，2013（1）：36-37.

［2］孙伟洁，杨宏志，李佩毅，等.溶剂法提取亚麻木酚素的工艺研究［J］.粮油加工，2009（2）：58-61.

［3］冯小慧，张福金，邵文捷，等.亚麻木酚素实验室提取的关键影响因子研究［J］.内蒙古农业科技，2013（5）：35-36.

［4］冯小慧，邵文捷，李国银，等.亚麻木酚素提取方法研究［J］.农产品加工（学刊），2014（1）：30-31.

［5］陈志强，高岚，郑跃，等.正交设计法优选亚麻籽饼粕中亚麻木酚素的提取工艺 ［J］.天津农业科学，2008，14（2）：1-3.

［6］胡晓军.亚麻木酚素的营养保健作用［J］.中国食物与营养，2005（8）：36-37.

［7］杨宏志.亚麻籽中木脂素提取工艺的研究［J］.农产品加工（学刊），2005（4）：18-20，23.

［8］赵利，党占海，李毅.亚麻木酚素研究进展［J］.食品科学，2006，22（4）：88-93.

Determination of Lignan in Flaxseed by HPLC

FENG Xiao-hui1，2，LI Guo-yin1，2，SONG Jie1，2，SHAO Hai3
（1.Supervision，Inspection and Testing Centre of Agricultural Products Quality and Security （Hohhot），Ministry of Agriculture，Hohhot 010031，China；2.Institute of Resources，Environment and Detection Technology，Inner Mongolia Academy of Agricultural and Animal Husbandry Sciences，Hohhot 010031，China；3.Management Station for Agricultural and Livestock Products Quality and Security of Chifeng City，Chifeng 024000，China）

［Objective］To establish a HPLC method for determination of lignan in flaxseed.［Methods］The samples were treated with liquid-liquid extraction;the standard substance of lignan was used to conduct quantitative analysis;Agilent C18Sym chromatographic column （250 mm×4.6 mm） was used to isolate;aqueous solution of methanol（methanol∶water=4∶6） was used as mobile phase;lignan were detected by UV detector with wavelength of 290 nm;methodology validation were conducted by using standard addition recovery test and precision test.［Results］The recovery of lignan in flaxseed ranged from 95%to 108%,and the RSD of precision was 7.43%.The rechecked results of determination of lignan in flaxseed by the established HPLC method from different laboratories were similar,which proved the good repeatability of the method.［Conclusion］The established HPLC method could be used for determination of lignan in flaxseed and provided reliable experimental basis for the industrial lignan purification.

flaxseed；lignan；HPLC；determination

TS201.2

A文章顺序编号：1672-5190（2016）12-0017-02

2016-11-11

项目来源：内蒙古农牧业科学院青年创新基金（2014 QNJJN05）。

冯小慧（1979—），女，高级农艺师，主要从事农产品质量监督检测工作。

（责任编辑：钱英红）