王晓云 徐诗涵 梁志宏 黄昆仑

（中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）

毕赤酵母表达重组牛胰脏羧肽酶A的响应面法优化

王晓云 徐诗涵 梁志宏 黄昆仑

（中国农业大学食品科学与营养工程学院，北京 100083）

采用Central Composite Design（CCD）实验设计及响应面分析相结合的方法，对毕赤酵母表达牛胰脏羧肽酶A的表达条件进行优化，旨在获得牛胰脏羧肽酶A的最佳表达条件。单因素实验结果显示，诱导时间为96 h时，最佳甲醇含量为0.5%、最佳pH值为4、诱导时最佳菌体OD600值为7。在此基础上，利用CCD实验设计及响应面分析法进行回归分析，获得最优表达参数为：甲醇含量0.5%、诱导pH为5.90、接种前种子培养基OD600为6.54。在优化后的条件下进行验证实验，得到牛胰脏羧肽酶A的表达量为0.325 mg/mL，与理论值（0.326 mg/mL）相比，相对误差较小，为0.38%。同时，对表达产物进行了Western Blot鉴定。研究表明，采用响应面法分析优化牛胰脏羧肽酶A的表达条件准确可靠，有助于找出最佳条件，为指导其在发酵罐中进行高密度发酵生产牛胰脏羧肽酶A奠定基础。

牛胰脏羧肽酶A；毕赤酵母；响应面

羧肽酶（carboxypeptidases，CPs）是一种专一性地从肽链的C端逐个降解、释放游离氨基酸的一类肽链外切酶。主要分为丝氨酸羧肽酶（EC 3.4.16-）、金属羧肽酶（EC 3.4.17-）和半胱氨酸羧肽酶（EC 3.4.18-）3个亚类。羧肽酶广泛应用于医药、食品等工业领域。在食品工业，可用于制备高F值寡肽［1］，食品和饲料中赭曲霉素的去除［2］、用作脱苦味剂［3］等。动物来源的羧肽酶主要存在于猪、牛等的胰脏中，如羧肽酶A/B（carboxypeptidaseA/B），其数量非常有限、价格昂贵、导致其应用受到限制。……