毛玉梅,李　琴,付鸣佳,金华燕,沈俊良,钟雪晴

(江西师范大学 生命科学学院,江西 南昌　330022)



蛹虫草CmKexin基因克隆和菌丝体中表达检测

毛玉梅,李琴,付鸣佳,金华燕,沈俊良,钟雪晴

(江西师范大学 生命科学学院,江西 南昌330022)

为了探讨蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)的表达特性,以真菌蛹虫草菌丝体为研究对象,通过RT-PCR获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列,并进行序列分析。应用Northern杂交和Real-time PCR方法,检测蓝光照射后蛹虫草菌丝体中CmKexin基因的转录情况。结果获得蛹虫草CmKexin基因的ORF序列。对翻译蛋白质产物CmKexin进行生物信息学分析,表明该蛋白质含1个属蛋白转化酶的肽酶S8家族功能域(143～429)和1个前体蛋白转化酶P功能域 (514～600),符合真菌类枯草杆菌蛋白酶的特征。蛹虫草菌丝体在黑暗预培养4 d后再蓝光照射,Northern Blotting和Real-time PCR检测均可得到相同的结果,即在持续的蓝光照射48～50 h时,出现CmKexin基因的瞬时大量转录。而其他时间内均未检测到该基因的大量转录。试验结果将为蛹虫草类枯草杆菌蛋白酶的利用提供理论依据。

蛹虫草;CmKexin基因;类枯草杆菌蛋白酶;Northern杂交;实时荧光定量PCR

枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin)为一类芽孢杆菌属(Bacillus)细菌分泌的胞外丝氨酸蛋白水解酶,在其他生物中也广泛存在类枯草杆菌蛋白酶(Subtilisin-like protease)[1-5]。代表性的这类蛋白酶有人的弗林蛋白酶(Furin)[6-7]和酿酒酵母(Saccharomycescerivisiae)的Kexin蛋白[8]。其中从酿酒酵母中克隆获得的KEX2基因,其编码的蛋白质称为Kexin[8]。Kexin是一个蛋白质前体加工酶,其催化结构域与类枯草杆菌蛋白酶家族的催化结构域相似,因此也可称为类枯草杆菌蛋白酶前体蛋白转换酶(Subtilisin-like pro-protein convertases,SPCs)。……