韩　玮, 苏力担卡扎·仇曼, 何铁英, 程　坤, 郝晓文, 王　松, 陈启龙

(新疆医科大学第一附属医院胰腺外科， 乌鲁木齐　830054)



大鼠骨髓间充质干细胞分离培养及鉴定

韩玮, 苏力担卡扎·仇曼, 何铁英, 程坤, 郝晓文, 王松, 陈启龙

(新疆医科大学第一附属医院胰腺外科， 乌鲁木齐830054)

目的探索大鼠骨髓间充质干细胞(Bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)的分离、培养及鉴定方法。方法采用贴壁分离方法，分离纯化3～4周龄SD大鼠的骨髓间充质干细胞，观察细胞生长状况，分别用免疫荧光染色、流式细胞仪鉴定及4′,6-二脒基-2-苯基吲哚(DAPI)标记细胞核的方法鉴定BMSCs纯度及活性。结果原代BMSCs呈圆形、大小均一，透光性可，24 h后开始贴壁，2 d后开始长出伪足，7～8 d细胞融合达90%，纯化后BMSCs呈梭形，24 h 细胞贴壁率可达99%，前4代细胞传代周期为7 d，之后传代周期逐渐缩短。第3代BMSCs的表面标志物CD29阳性表达率为98.9%,CD44阳性表达率为73.3%。DAPI标记的BMSCs胞核可见明亮蓝色荧光,标记率达100%。结论贴壁分离法分离大鼠BMSCs，可得到纯度较高、活力强的BMSCs，第3代BMSCs生物学性状稳定。

骨髓间充质干细胞； 细胞培养； 大鼠

骨髓间充质干细胞(BMSCs)为非造血干细胞，存在于骨髓中，易于获得及分离培养，可诱导为多重细胞，分泌多重生长因子、酶及趋化因子，在组织器官的修复及促进组织器官生长过程中起到关键作用[1]。分离BMSCs的方法有 密度梯度离心法、全骨髓培养法、表型分离法、纤维蛋白微珠法、流式细胞仪分离法等[2]。目前分离大鼠BMSCs尚无统一的方法，获得高纯度、细胞形态稳定的大鼠BMSCs是进行后续实验的重要前提。……