牟庆璇，胡美荣，陈飞，江贤章，陶勇，黄建忠



采用混合策略提高葡萄糖氧化酶在毕赤酵母中的表达水平

牟庆璇1，胡美荣2，陈飞1，江贤章1，陶勇2，黄建忠1

1 福建师范大学 生命科学学院，福建 福州 350108 2 中国科学院微生物研究所，北京 100101

为了提高葡萄糖氧化酶 (GOD) 在毕赤酵母中的表达水平，提出了甲醇/山梨醇混合碳源诱导和共表达分子伴侣二硫键异构酶 (PDI) 和透明颤菌血红蛋白 (VHb) 两种策略。利用对照菌株X33/pPIC9k–GOD 在5 L发酵罐放大培养时，采用甲醇/山梨醇混合碳源诱导，GOD最终酶活为456 U/mL，比只采用甲醇作为单一碳源诱导时GOD最终酶活提高了20%。利用整合伴侣蛋白菌株X33/pPIC9k-GOD/pPICZ-PDI-VHb在5 L发酵罐进行高密度发酵，采用甲醇/山梨醇混合碳源诱导，GOD最终酶活达到716 U/mL，蛋白浓度为7.4 g/L。研究结果对提高外源蛋白在毕赤酵母中的表达有重要参考价值。

毕赤酵母，葡萄糖氧化酶，二硫键异构酶，透明颤菌血红蛋白酶，山梨醇

葡萄糖氧化酶 (Glucose oxidase，GOD)，又名β-D-葡萄糖氧化还原酶，系统编号EC1.1.3.4，能够专一的将β-D-葡萄糖氧化，同时产生过氧化氢和葡萄糖酸。高纯度的葡萄糖氧化酶为淡黄色粉末[1]，一般酶制剂中还含有过氧化氢酶，构成葡萄糖氧化酶-过氧化氢酶复合体，共同起作用[1-3]。葡萄糖氧化酶在食品、医药、分析化学、临床化学和畜牧业等行业应用十分广泛。

黑曲霉来源的GOD分子量为138 kDa，两个亚基的分子量约70 kDa。其最适pH为6.7，最适反应温度为30 ℃，max值为35.71 μmol/min，m值为35.74 mmol/L[4]。

目前研究的GOD主要来源于青霉菌或黑曲霉。在之前的报道中，在瑞氏木霉和产黄青霉中表达GOD，最终酶活分别为25 U/mL、11.45 U/mL和 17.2 U/mL[5-6]。……