陈洪基，姜国良*，闫广思

（中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003）

一株褐藻酸裂解酶高产菌的筛选及其酶学性质研究

陈洪基，姜国良*，闫广思

（中国海洋大学海洋生命学院，山东青岛266003）

从腐烂的海带中筛选出一株褐藻酸裂解酶（A ly）高产菌，经形态学分析、生理生化特征和分子水平鉴定，该菌为交替假单胞菌属，命名为Pseudoalteromonas sp.EE258。利用硫酸铵沉淀、快流速DEAE-琼脂糖凝胶（DEAE-sepharose Fast Flow）和丙烯葡聚糖凝胶（Sephacryl S-100）柱层析等方法，对Pseudoalteromonas sp.EE258产生的褐藻酸裂解酶A ly-EE258进行分离纯化，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）测定该酶的分子质量为23 ku。酶学性质研究显示：该酶的最适反应温度为40℃，最适反应pH值为7.0，在20℃以下时稳定性较好，Ca2+和Ba2+能明显提高酶的活性，Fe2+、A l3+、Mg2+和乙二胺四乙酸（EDTA）抑制酶的活性。Aly-EE258能不同程度地裂解褐藻酸、聚古洛糖醛酸和聚甘露糖醛酸，其中聚甘露糖醛酸裂解后主要产生单一的低聚寡糖，在实际应用方面具有重要意义。

交替假单胞菌属；褐藻酸裂解酶；酶学性质

褐藻酸（alginate）是一种大分子线性多糖，β-D-甘露糖醛酸（β-D-mannose hyaluronic acid，M）和其C5差向异构体α-L-古罗糖醛酸（α-L-guluronic acid，G）通过α-1，4-糖苷键结合形成3种褐藻酸分子：聚β-D-甘露糖醛酸（ploymannuronic acid，PolyM），聚α-L-古罗糖醛酸（poly gulonic hyaluronic acid，PolyG）和杂聚物（ploy mannuronic acid and gulonic hyaluronic acid，PolyMG）［1］。研究发现，褐藻酸降解产物褐藻酸寡糖具有多种生物活性，包括促生长作用、增强免疫力抗肿瘤活性、诱导子活性、神经保护作用等［2-3］，因此其功能性寡糖的开发在国际上己成为一个研究热点。

褐藻酸裂解酶是一类多糖裂解酶，通过β-消去反应能够降解大分子褐藻酸生成低分子量的褐藻酸寡糖或单糖［4］，主要来源于海洋动物、海洋细菌及真菌等［5］。……