李　睿，阮文辉

纳豆激酶NKII分离纯化及其酶促动力学研究

李睿1，阮文辉2*

（1.山西中医学院，山西 太原 030024；2.山西省医药与生命科学研究院，山西 太原 030006））

该实验主要采用疏水柱层析分离纯化纳豆激酶NKII，聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）结果为单一蛋白条带，分子量为28 ku，酶活回收率56.51%，纯化倍数17.90，比活力达48 407.77 IU/mg。采用纤维蛋白平板法及显色底物法测定酶活力，结果表明，两种方法相关性高。以S-2251为底物的动力学研究表明，米氏常数Km值为0.379 6 mmol/L，最大反应速度Vm值为0.059 8 mmol/（L·min），Ca2+、Mg2+对酶活稳定性效果明显。

纳豆激酶；分离纯化；酶学性质

随着人们生活节奏的加快、饮食结构的改变等，全球血栓栓塞性疾病的临床发病率越来越高，心梗、脉管栓塞［1］等均为其引起的常见突发疾病，危害严重，发病年龄年轻化，给生活质量带来极大影响［2］。针对此现状，近年来溶栓治疗和预防类的保健食品及药物的研发进展迅速［3-5］。纳豆激酶（nattokinase，NK）最初源自日本传统的健康发酵食品—纳豆，由纳豆枯草芽孢杆菌表达，属丝氨酸蛋白酶，具有很强的溶栓活性。对其的研究多集中在菌种选育、表达优化、溶栓机理［6］、活性测定方法、纯化方法、基因的克隆与表达［7］等方面。NK溶栓途径有直接降解纤维蛋白、激活尿激酶与组织型纤溶酶原激活剂等，溶栓效果好，易提取、成本低、半衰期长、特异性强、不引起系统性纤溶、食源性安全无毒副作用、易吸收、可口服，具有很好的开发潜力。

本研究对象为筛选所得纳豆枯草芽孢杆菌，产酶量大、活性高，具有极高工业应用价值。……