王俊娟，穆 敏，王 帅，陆许可，陈修贵，王德龙，樊伟丽，阴祖军，郭丽雪，叶武威，喻树迅

（中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室/农业部棉花遗传改良重点开放实验室，河南安阳 455000）

棉花脱水素GhDHN1的克隆及其表达

王俊娟，穆 敏，王 帅，陆许可，陈修贵，王德龙，樊伟丽，阴祖军，郭丽雪，叶武威，喻树迅

（中国农业科学院棉花研究所/棉花生物学国家重点实验室/农业部棉花遗传改良重点开放实验室，河南安阳 455000）

【目的】通过对棉花脱水素基因结构特征及其在低温胁迫下表达模式进行分析，探讨脱水素在棉花响应低温过程中的功能，为棉花抗冷育种提供理论基础。【方法】以棉花抗冷品种豫2067为试验材料，根据棉花陆地棉基因组序列查找已知脱水素（dehydrin，Dhn）基因的CDS序列，利用Primer5软件设计引物，克隆该基因，并命名为GhDHN1；采用生物信息学方法分析其蛋白质性质、氨基酸含量特征、功能结构域、系统进化树；选择XbaⅠ和SmaⅠ酶切位点对植物表达载体pBI121∶∶GFP进行双酶切，采用In-Fusion连接技术构建融合蛋白瞬时表达载体pBI121-GhDHN1∶∶GFP；分析其在洋葱表皮细胞中的瞬时表达，进行亚细胞定位；利用抗冷材料豫2067在三叶期对低温处理（4℃，24 h）前后的叶片和根系进行转录组测序，筛选差异表达基因；在三叶期时分别对豫2067（抗冷品种）和衡棉3号（冷敏感品种）进行低温（4℃，24 h）处理，利用实时荧光定量方法分别比较根、茎、叶中GhDHN1表达量，对该基因在2个抗冷差异材料叶中的表达量进行比较；对豫2067进行不同时间低温（4℃）处理，分析GhDHN1在叶片和根中的动态表达模式。……