向亚萍，周华飞，刘永锋，陈志谊

（1江苏省农业科学院植物保护研究所，南京 210014；2南京农业大学植物保护学院，南京 210095）

解淀粉芽孢杆菌B1619脂肽类抗生素的分离鉴定及其对番茄枯萎病菌的抑制作用

向亚萍1，2，周华飞1，2，刘永锋2，陈志谊1，2

（1江苏省农业科学院植物保护研究所，南京 210014；2南京农业大学植物保护学院，南京 210095）

【目的】从解淀粉芽孢杆菌（Bacillus amyloliquefaciens）生防菌株B1619发酵液上清中分离脂肽类抗生素，分析其抑菌活性相关成分，为应用解淀粉芽孢杆菌B1619菌株防控番茄枯萎病提供依据。【方法】利用特异性引物对B1619中3种脂肽类抗生素合成相关基因sfp、ituA和fenB进行检测；通过盐酸沉淀、甲醇抽提法等方法提取脂肽类抗生素粗提物；用SupelcleanTMLC-18柱及PHASE HF-NH2柱对3种脂肽类抗生素粗提物进行分离；通过MALDI-TOF-MS和HPLC分析、鉴定3种脂肽类抗生素；采用平板对峙培养分别测定3种脂肽类抗生素粗提物对番茄枯萎病菌（Fusarium oxysporum f.sp.lycopersici）的抑菌活性。【结果】从解淀粉芽孢杆菌B1619的基因组DNA中扩增sfp、ituA和fenB等脂肽类抗生素合成基因，扩增产物经克隆、测序分析，表明B1619菌株中含有这3个基因。通过HPLC分析，发现60%甲醇洗脱液分离物分别在12、16.5、18 min处出现相应峰值，保留时间与bacillomycin L标准品一致，分泌量为18.5 mg·L-1；70%甲醇洗脱液分离物分别在22、34、37、51及53 min处出现相应峰值，保留时间与fengycins标准品一致，分泌量为5.1 mg·L-1；100%甲醇洗脱液分离物分别在27、37、41、51及53 min处出现相应峰值，保留时间与surfactins标准品一致，分泌量为74.3 mg·L-1。经液质联用进一步验证分析3种脂肽类抗生素的质子化峰值，60%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z=1 043.4、1 057.5和1 071.4 Da，是C13—C15的bacillomycin L；70%甲醇洗脱液分离物峰值范围在m/z= 1 463.9、1 477.9、1 491.9和1 505.9 Da，是C15—C17的fengycins；……