王锐丽，孙　伟，薛业敏

（1.信阳农林学院 生物与制药工程学院，河南 信阳 464000；2.南京师范大学 金陵女子学院，江苏 南京 210097）

嗜热菌β-葡萄糖苷酶A基因的克隆表达及转化大豆异黄酮糖苷

王锐丽1，孙伟1，薛业敏2

（1.信阳农林学院 生物与制药工程学院，河南 信阳 464000；2.南京师范大学 金陵女子学院，江苏 南京 210097）

对嗜热厌氧乙醇菌（Thermoanaerobacter ethanolicus）JW200基因组DNA中β-葡萄糖苷酶A基因（Te-BglA）进行PCR扩增，构建重组质粒pET-20b-Te-BglA，并对纯化的重组酶Te-BglA的酶学性质和动力学参数进行研究。结果表明，基因Te-BglA在Escherichia coli细胞中成功表达，获得重组酶Te-BglA，该酶的最适温度和pH值分别为80℃和7.0。以对硝基苯酚-β-葡萄糖苷（pNPG）为底物时，Km值为（0.78±0.02）mmol/L，Kcat/Km值为（6.86±0.16）×104L/（mol·s）；以天然底物水杨苷为底物时，Km值为（5.18±0.10）mmol/L，Kcat/Km值为（2.04±0.02）×104L/（mol·s），两者比较可知，重组酶Te-BglA表现出对pNPG更好的亲和力和更高的催化效率常数。该酶在80℃保温1 h后相对于冰浴中（未保温）的酶活仍有70.1%的残留，在pH 4.5～8.0区间仍保持较高的pH稳定性。酶解大豆粉的结果表明，重组酶Te-BglA在80℃作用3 h后，大豆黄素和染料木素的产量分别达到35.9 mg/g和59.1 mg/g。

β-葡萄糖苷酶；酶学性质；大豆异黄酮糖苷；苷元

大豆异黄酮因具有抗肿瘤作用、缓解更年期综合征、抗辐射、延缓衰老等功效而成为国内外研究热点［1-3］。目前研究发现的12种大豆异黄酮根据结构的不同分为两大类：游离型苷元（染料木素、大豆素和黄豆黄素，占有比例少）和结合型糖苷，约占总量的97%～98%。药理学研究发现，大豆异黄酮的作用特点与虎仗中的白藜芦醇苷等中药类糖苷类似［4-6］，即被人体肠道吸收的是它的苷元形式，糖苷形式必须转化为相应的苷元才能真正发挥药效。……