林美珍，蒋梅琴，李水琴，林妍，黄义德

福建师范大学 生命科学学院 福建省发育与神经生物学重点实验室，福建 福州 350108

生物技术与方法

人牙本质涎磷蛋白启动子驱动LacZ报告基因在人牙胚间充质细胞中表达

林美珍，蒋梅琴，李水琴，林妍，黄义德

福建师范大学 生命科学学院 福建省发育与神经生物学重点实验室，福建 福州 350108

林美珍， 蒋梅琴， 李水琴， 等. 人牙本质涎磷蛋白启动子驱动 LacZ报告基因在人牙胚间充质细胞中表达. 生物工程学报， 2016， 32（8）: 1133-1144.

Lin MZ， Jiang MQ， Li SQ， et al. Expression of the reporter LacZ driven by human dentin sialophosphoprotein promoter in human dental mesenchymal cells. Chin J Biotech， 2016， 32（8）: 1133-1144.

牙本质涎磷蛋白 （DSPP） 的表达是细胞向成牙本质细胞分化的标志。试图分析人 DSPP启动子及构建人DSPP启动子驱动的LacZ基因表达的报告体系，从而方便快捷检测细胞是否向成牙本质细胞分化。为了建立能表达DSPP的细胞体系，分离了人牙胚间充质细胞，并用地塞米松诱导培养液进行诱导，结果显示，该诱导培养液能有效地诱导人牙胚间充质细胞DSPP基因的表达。利用双荧光素酶报告系统对4段人DSPP基因5′上游区域 （-4 000-+54、-2 500-+54、-1 447-+54和-1 027-+54） 进行分析，结果显示-2 500-+54区域的启动子活性最高。5′上游区从-2 500 bp延长到-4 000 bp时，启动子活性下降；5′上游区从-2 500 bp缩短至-1 447 bp时，启动子活性下降；再次将-1 447 bp缩短至-1 027 bp时，启动子活性进一步下降。结果暗示在-4 000 bp至-2 500 bp区域存在转录抑制元件，-2 500 bp至-1 027 bp区域存在转录激活元件。用-2 500-+54启动子区域和LacZ基因构建phDSPP-LacZ慢病毒报告载体，并分别在人牙胚间充质细胞和永生化人牙胚间充质细胞系ihEDMC4上检测phDSPP-LacZ报告载体的功能，通过X-Gal染色，结果显示在2种细胞牙向分化过程中均可检测到LacZ基因的表达。……