任海月，董彬，樊振川，2，3，孟德梅，2，3

1 天津科技大学 食品工程与生物技术学院 教育部食品营养与安全重点实验室，天津 3004572 天津市食品营养与安全和药物化学联合实验室，天津 3004573 天津科技大学 新农村发展研究院，天津 300457

生物技术与方法

莱茵衣藻纤毛内运输蛋白IFT46的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备

任海月1，董彬1，樊振川1，2，3，孟德梅1，2，3

1 天津科技大学 食品工程与生物技术学院 教育部食品营养与安全重点实验室，天津 300457
2 天津市食品营养与安全和药物化学联合实验室，天津 300457
3 天津科技大学 新农村发展研究院，天津 300457

任海月， 董彬， 樊振川， 等. 莱茵衣藻纤毛内运输蛋白 IFT46的原核表达纯化及其多克隆抗体的制备. 生物工程学报，2016， 32（8）: 1124-1132.

Ren HY， Dong B， Fan ZC. Prokaryotic expression and purification of Chlamydomonas reinhardtii intraflagellar transport protein 46 （IFT46） and preparation of polyclonal antibody. Chin J Biotech， 2016， 32（8）: 1124-1132.

IFT46是纤毛内运输蛋白IFT复合物B （IFT-B） 的一个重要组分，对于纤毛的组装、运动和感知发挥着重要作用。为深入研究IFT46的作用机制，利用ift46基因全序列分别构建了带有GST和MBP标签的原核表达载体pGEX-2T-ift46和pMAL-C2X-ift46，并转入大肠杆菌BL21 （DE3） 诱导表达，以15% SDS-PAGE鉴定，分别获得了分子量为70、86 kDa的重组GST/MBP-IFT46融合蛋白。将亲和纯化的GST-IFT46融合蛋白 （纯度95%以上） 免疫新西兰大白兔，采集第5次免疫后血清用ELISA测定效价为1∶256 000。抗血清依次经Protein A和固定在MBP-IFT46纯化后，用Western blotting 和免疫荧光检测抗体特异性，结果表明制备的多克隆抗体能很好地识别莱茵衣藻中的IFT46，而且发现IFT46绝大部分定位在纤毛基体，极少部分沿纤毛呈点状分布，为继续开展 IFT46在肥胖症、糖尿病、多囊肾病等纤毛相关疾病中作用机制的研究奠定了重要基础。

莱茵衣藻，纤毛，IFT46，原核表达，蛋白纯化，多克隆抗体