安云鹤，高丽娟，李俊博，田彦捷，王金龙，郑学娟，武会娟

1 北京市理化分析测试中心，北京 1000892 北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心，北京 100094

生物技术与方法

PCR扩增循环数对细菌群落多样性测序分析的影响

安云鹤1，2，高丽娟1，2，李俊博1，2，田彦捷1，2，王金龙1，2，郑学娟1，2，武会娟1，2

1 北京市理化分析测试中心，北京 100089
2 北京市基因测序与功能分析工程技术研究中心，北京 100094

安云鹤， 高丽娟， 李俊博， 等. PCR 扩增循环数对细菌群落多样性测序分析的影响. 生物工程学报， 2016， 32（8）: 1115-1123.

An YH， Gao LJ， Li JB， et al. Influence of PCR cycle number on microbial diversity analysis through next generation sequencing. Chin J Biotech， 2016， 32（8）: 1115-1123.

运用高通量测序技术分析复杂样品中微生物群落组成及变化趋势，已经成为目前微生物研究领域的热点之一。本研究以复杂土壤样品和应用范围较广的瘤胃食糜样品为对象，选取20、25和30三个扩增循环数分别对样品的16S rRNA基因的V3区进行扩增，然后进行文库构建和测序。最后通过数据分析比较不同的扩增循环数对细菌多样性测定结果的影响。结果表明，扩增循环数越多，捕获到的细菌数量和种类越多；但并非循环数越多，群落中的微生物组成比例最优。整体来看，当扩增循环数为25时，样品中物种的数量和组成是最优的。

PCR扩增循环数，高通量测序，微生物多样性分析

目前，能够在实验室条件下培养的微生物种类占自然界中微生物总数的不到1%，绝大多数尚未被人类所认识［1］。随着分子生物学技术的发展，PCR指纹技术［2-3］、DNA 文库［4-5］、RAPD［6-7］、ITS［8-9］、DGGE［10-11］等技术相继被广泛应用于微生物群落结构及基因资源的开发利用，从而摆脱了培养的限制。……