王克迪　苏建荣

(首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心， 北京 100050)



· 基础研究 ·

化学发光微粒子免疫检测法筛查梅毒的结果分析

王克迪苏建荣*

(首都医科大学附属北京友谊医院临床检验中心， 北京 100050)

目的应用全自动微粒子发光免疫分析仪(i2000)进行梅毒筛查，并通过梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponemapallidumparticle agglutination assay， TPPA)进行确证，对采用化学发光微粒子免疫检测法(chemiluminescent microparticle immunoassay， CLIA)法筛查梅毒的结果进行分析。方法36 000例标本均经过CLIA检测，以S/CO值大于1.0为阳性，阳性者进行TPPA确证，计算CLIA方法的检测敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值。结果以TPPA作为参考标准，CLIA的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100%、99.7%、68.3%和100%，当S/CO值为1.08时，Youden指数最大，敏感度为100%，特异度94.8%。结论CLIA法是进行梅毒螺旋体感染初筛的可靠方法。

化学发光微粒子免疫分析法；梅毒螺旋体；敏感度；特异度

梅毒是由梅毒螺旋体(Treponemapallidum， TP)感染引起的一种性传播疾病[1]。据世界卫生组织统计，全世界每年新增病例达到1 200万例，已经成为严重威胁人类健康的传染病之一[2]。梅毒在中国也呈现复燃的趋势[3-4]，因此，扩大和加强梅毒筛查是十分重要的。梅毒是由苍白螺旋体感染引起，被感染者血清中可产生非特异性反应素抗体和梅毒螺旋体的特异性抗体。临床常用的梅毒抗体检测方法为凝集法，需要手工加样而不能自动化，这已经不能满足临床日益增长的工作量的需求[5-6]。化学发光微粒子免疫分析法(chemiluminescent microparticle immunoassay， CLIA)法是近年发展的检测梅毒特异性抗体的方法，通过全自动微粒子发光免疫分析仪完成检测过程，具有操作简便、易于标准化等优点。本文拟应用全自动微粒子发光免疫分析仪(i2000)进行梅毒筛查，并通过梅毒螺旋体明胶凝集试验(Treponemapallidumparticle agglutination assay， TPPA)进行确证，探讨CLIA法作为临床筛查梅毒常规方法的可行性。

1　材料和方法

1.1标本来源

所有标本来源于2013年4月至2013年12月在首都医科大学附属北京友谊医院就诊的门诊及住院患者，共计36 000例。其中男性15 790例，女性20 210 例，年龄15～90岁。采血要求：空腹采静脉血3 mL，3 000 r/min离心 10 min，分离血清待检测。

1.2仪器与试剂

全自动微粒子发光免疫分析仪(i2000)购自美国雅培公司，化学发光微粒子免疫分析试剂由美国雅培公司提供。TPPA试剂由日本富士株式会社提供。

1.3方法

所有标本都进行CLIA检测，阳性者(即S/CO值大于1.0)进行TPPA确诊检测。所有检测操作程序和结果判断均按试剂说明书严格进行，并在试剂有效期内使用。

1.4统计学方法

用SPSS 13.0统计软件对结果进行统计学分析。不同科室、性别和年龄间TP阳性率比较采用χ2检验；最佳cutoff值根据受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)确定。以P<0.05为差异有统计学意义。

2　结果

2.1应用TP-CLIA法检测梅毒结果分析

36 000例标本经TP-CLIA初筛检测，252例阳性标本，阳性率为0.7%，阳性标本再进行TPPA检测，共检出172例阳性，阳性率为0.48%。以TPPA检测结果为金标准，TP-CLIA检测结果与之进行比较，计算其检测的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值，详见表1。

2.2临床资料分析

将所有TP阴性标本和TP阳性标本分布按照科室、性别和年龄统计，详见表2。结果显示不同科室TP阳性率差异有统计学意义，皮肤性病科阳性率显著高于妇产科和术前筛查患者，而TP感染率与年龄和性别差异无统计学意义。

2.3 假阳性结果分析

TP-CLIA检测假阳性标本共80例，假阳性率为0.22% [80/(35748+80)]。其中，妊娠期妇女30例，老年人群(>60岁)14例，肿瘤患者12例，透析患者10例，肾移植患者2例，自身免疫性疾病患者4例，其他8例。详见图1。

2.4 TP-CLIA诊断梅毒的ROC曲线结果

TP-CLIA法作为诊断TP的方法时，ROC曲线下面积为0.994，当Youden指数(即敏感度与特异度之和)最大时，所对应的值即为cutoff值，本文中，当cutoff值为1.08时，Youden指数最大，此时敏感度为100%，特异度94.8%，详见图2。ROC曲线下面积为0.994，当Youden指数最大时，即敏感度与特异度之和最大时，所对应的值即为cutoff值，本文中，当Youden指数最大时，cutoff值为1.08时，敏感度为100%，特异度为94.8%。

表1　应用TP-CLIA和TPPA方法检查结果比较

TP：Treponemapallidum； CLIA：chemiluminescent microparticle immunoassay； TPPA：treponemapallidum particle agglutination assay.

表2　研究人群来源科室、性别和年龄的分布

TP：Treponemapallidum； STD：sexually transmited disease.

图1　TP-CLIA检测假阳性标本分析

图2　TP-CLIA诊断梅毒的ROC曲线

TP：Treponemapallidum； CLIA：chemiluminescent microparticle immunoassay; ROC：receiver operating characteristic curve.

3　讨论

梅毒螺旋体属于密螺旋体属苍白螺旋体的苍白亚种，感染人体后诱导产生梅毒非特异性抗体和梅毒特异性抗体。特异性抗体有IgM和IgG，分别在感染后2周和4周产生，早期梅毒治疗后3～9个月IgM可消失，晚期梅毒治疗后2年IgM可消失，而IgG终生存在。非特异性梅毒螺旋体抗体在感染后5～7周产生[7-8]，较特异性抗体晚，随疾病治愈转阴。因此，非特异性抗体检测可以监测患者是否为现症感染及其治疗效果，但在早期梅毒筛查中容易出现假阴性，且不能反映既往感染，需要手工操作和人工主观判读，不适合临床批量检测[9-10]。

雅培i2000以CLIA为检测原理，采用两步法进行TPsAb定性检测。TPsAb较nTsAb出现早、消失迟，即使患者治愈后仍可检测出特异性抗体，甚至可终身检出。CLIA法操作简便，检测时间短，自动化程度高，可批量检测，并且结果客观，适合标本量日益增多的临床工作需求。本研究中以TPPA为参照标准，CLIA方法的敏感度、特异度、阳性预测值和阴性预测值分别为100%、99.7%、68.3%和100%，具有较好的临床应用价值。

本研究中，CLIA初筛阳性标本存在0.22%的假阳性率，假阳性标本主要出现在早孕者、老年患者、恶性肿瘤患者、透析患者和自身免疫性疾病患者，其原因可能是这些患者体内存在抗脂类抗体或梅毒螺旋体交叉抗原，老年患者免疫功能减弱，出现一些异种蛋白的干扰。初筛结果为假阳性或与复检结果不符时，往往会给医生和患者造成困扰。因此本课题组推荐对所有标本首先进行CLIA初筛，筛查阳性的标本进行TPPA复检，对于TPPA复查阳性的标本再补做快速血浆反应素试验检测，这样既提高了检出率和检测效率，也能避免CLIA假阳性的干扰。此外，根据ROC曲线，Youden指数最大时，cutoff值为1.08，此时敏感度为100%，特异度为94.8%，各临床实验室可以根据最佳cutoff值调整临床诊断临界值，获得较满意的敏感度和特异度。

综上所述，CLIA可以作为临床实验室进行大样本量梅毒筛查的检测方法，但对于阳性标本，尤其是S/CO值介于1～3的标本，尚需要行TPPA、RPR检测，排除假阳性标本，并结合临床进一步明确诊断。

[1] Waugh M. The centenary of treponema pallidum： on the discovery of spirochaeta pallida[J]. Skinmed，2005，4(5)：313-315.

[2]The Sexually Transmitted Diseases Diagnostics Initiative (SDI), Special Programme for Research & Training in Tropical Diseases (TDR). The use of rapid syphilis tests[EB/OL]. [2015-07-02]. http://www.who.int/reproductivehealth/publications/rtis/TDR_SDI_06_1/en/.

[3] Fisman D N. Syphilis resurgent in China[J]. Lancet，2007，369(9556)：84-85.

[4] Mattei P L， Beachkofsky T M， Gilson R T， et al. Syphilis： a reemerging infection[J]. Am Fam Physician，2012，86(5)：433-440.

[5] Marangoni A， Moroni A， Accardo S， et al. Laboratory diagnosis of syphilis with automated immunoassays[J]. J Clin Lab Anal，2009，23(1)：1-6.

[6] Sena A C， White B L， Sparling P F. Novel Treponema pallidum serologic tests： a paradigm shift in syphilis screening for the 21st century[J]. Clin Infect Dis， 2010，51(6)：700-708.

[7] Loeffelholz M J， Binnicker M J. It is time to use treponema-specific antibody screening tests for diagnosis of syphilis[J]. J Clin Microbiol，2012，50(1)：2-6.

[8] Juárez-Figueroa L， Uribe-Salas F， García-Cisneros S， et al. Evaluation of a rapid strip and a particle agglutination tests for syphilis diagnosis[J]. Diagn Microbiol Infect Dis，2007，59(2)：123-126.

[9] 邓关霞，张晓红，赵飞骏. 梅毒实验室检测方法的研究进展[J]. 微生物学免疫学进展，2016，44(1)：76-81.

[10]王宁.梅毒实验室检测的应用现状[J]. 医学信息，2015，28(35)：260-261.

编辑孙超渊

Analysis of automated chemiluminescent microparticle immunoassay for the screening of syphilis

Wang Kedi， Su Jianrong*

(ClinicalLaboratory，BeijingFriendshipHospital，CapitalMedicalUniversity，Beijing100050，China)

ObjectiveCompared automated chemiluminescent microparticle immunoassay (CLIA) with conventional methods to analyze the results of CLIA for the screening of syhilis.Methods36 000 serum samples were tested by CLIA for screening of syphilis, and the positive samples would be subjected to TPPA for furhter confirmation. Then the sensibility, specificity, positive prediction value and negative prediction value were calculated. ResultsThe sensitivity and specificity of CLIA were 100% and 99.7%, respectively. When the value of S/CO value was 1.08, the Youden index reached maximum, the sensitivity and specificity of CLIA were 100% and 94.8%,respectively. ConclusionCLIA is suggested as a screening test for the diagnosis of syphilis.

automated chemiluminescent microparticle immunoassay;Treponemapallidum; sensitivity; specificity

10.3969/j.issn.1006-7795.2016.04.021]

R 446

2016-08-03)

*Corresponding author， E-mail：kedi-v@163.com

网络出版时间：2016-07-2021∶16网络出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3662.r.20160714.2116.042.html