鲍远　黄俊明　吴颖星　陈琨　程鹏　郭风劲　陈安民

·实验研究论著·

Yes相关蛋白通过Wnt/β⁃catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的研究

鲍远黄俊明吴颖星陈琨程鹏郭风劲陈安民

目的研究Yes相关蛋白（Yes⁃associated protein，YAP）通过Wnt/β⁃catenin信号通路调控软骨细胞Sox9表达的机制。方法用siRNA分别沉默YAP基因和Lats1基因来调控YAP的活性，通过Real⁃time PCR检测软骨特异性基因和Wnt/β⁃catenin信号通路下游基因的表达；通过Westernblot检测GSK3β的磷酸化水平、活化β⁃catenin的蛋白水平以及Sox9的蛋白水平；并通过阿利新蓝染色检测软骨细胞外基质的分泌情况。用siRNA沉默YAP基因后，再用氯化锂干预细胞，通过Westernblot检测Sox9的表达和GSK3β的磷酸化水平。结果沉默YAP基因后，磷酸化GSK3β和活化β⁃catenin的蛋白水平减少，c⁃Myc 和Nanog基因表达减少，Sox9、Col2和Aggrecan基因表达升高，并且软骨细胞分泌基质增多；沉默Lats1基因后，磷酸化GSK3β和活化β⁃catenin的蛋白水平增加，c⁃Myc和Nanog基因表达上调，Sox9、Col2和Aggre⁃can基因表达减少，并且软骨细胞分泌基质减少。此外，氯化锂可以阻断沉默YAP引起的Sox9表达上调。结论YAP通过Wnt/β⁃catenin信号通路调控软骨细胞Sox9的表达。

软骨细胞；细胞分化；Yes相关蛋白；信号传导；基因表达调控

关节软骨缺乏血管、神经、淋巴管和软骨前体细胞，再生修复能力十分有限［1，2］。创伤导致的关节软骨缺损若长期存在，易进展为骨性关节炎并引起关节疼痛和功能障碍。近年来，软骨组织工程兴起，为关节软骨缺损修复带来新的希望［3］。然而，研究发现软骨细胞在体外培养时很容易发生去分化而成为肥大软骨细胞，移植后由于失去分泌软骨基质的功能，无法形成正常的软骨组织［4］。……