赵晓彪，李光耀，刘孟刚，范　霞，陈　平△

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所:1.肝胆外科;2.一室,重庆 400042)



论著·基础研究

大鼠Tmub1基因过表达慢病毒载体的构建*

赵晓彪1，李光耀1，刘孟刚1，范霞2，陈平1△

(第三军医大学大坪医院野战外科研究所:1.肝胆外科;2.一室,重庆 400042)

目的构建Tmub1基因的过表达慢病毒载体(LV-Tmub1)，为研究Tmub1蛋白在肝细胞增殖过程中的作用提供实验材料。方法化学合成Tmub1基因序列，用BamHI/AgeI酶切化学合成含有目的基因的质粒及GV287载体，PCR产物连接入线性化表达的载体。PCR鉴定引物，再对 PCR鉴定阳性的克隆进行DNA测序和比对分析。使用构建的LV-Tmnb1，转染293T细胞，荧光法检测构建的慢病毒滴度。结果成功构建了LV-Tmub1，并获得相应的病毒，病毒滴度为 2×108TU/mL。结论LV-Tmub1为进一步研究Tmub1蛋白在肝细胞增殖中的作用提供了实验基础。

Tmub1；基因；过表达慢病毒载体；大鼠

Tmub1(transmemebrance and ubiquitin-like domain containing 1) 基因编码的Tmub1 蛋白是一个含有类似泛素结构域的能够在细胞核与细胞质之间穿梭的蛋白质[1-3]；在细胞周期的G0期主要位于肝细胞的细胞质内，在细胞增殖后期的G2～S期则几乎全部穿梭进入肝细胞核内。Della等[4]发现Tmub1蛋白在肝部分切除术后肝再生的过程中明显高表达，它包含有一个跨膜域和一个类似泛素结构的区域(UBL)，该区域包含与UCH、E2和CUE等的反应位点。所以说明它在肝细胞增殖过程中担负着复杂而又重要的功能。本研究构建Tmub1过表达慢病毒载体(LV-Tmub1)，用来转染肝细胞系及注射入实验动物体内，为深入了解Tmub1 基因和蛋白在肝细胞增殖和肝再生过程中的作用及分子生物学机制提供实验基础。……