陈加敏 朱承慧

(安徽省合肥市第一中学 230601)

绝大多数酶是具有一定空间结构的蛋白质，因蛋白质空间结构易受到pH等环境的影响，因此酶具有易变性的特点。若在不同pH条件下测定酶的反应速度，然后将测得的反应速度相对于pH作图，一般会得到“钟罩形”曲线。在特定pH下，酶促反应速度达到最大值，此值称为酶促反应的最适pH。但对于“钟罩形”的pH范围内，偏离最适pH导致酶活性下降的机理存在争议。因此，实验探究设想如下：根据酶失活后不能恢复活性的特点，偏离最适pH，若导致酶活性下降的原因是反应液中所有酶分子的整体活性下降；那么将不同pH处理的酶溶液，再放入最适pH条件下进行酶促反应，酶的活性将会100%的恢复；若酶的活性不能完全恢复，则应是部分酶失活所致。

1 材料方法

1.1 实验试剂 各种稀释倍数的唾液淀粉酶棉花过滤液、2%淀粉(含0.3% NaCl)溶液、0.2 mol/L Na2HPO4溶液、0.1 mol/L柠檬酸溶液、0.05% HCl溶液和0.05% NaOH溶液、KI-I2溶液(棕黄色)、斐林试剂(蓝色)、蒸馏水等。

不同pH磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液及其回调至pH 6.2的试剂用量见表1，如10mL pH 4的缓冲液配制方法为3.85mL 0.2mol/L Na2HPO4溶液和6.15mL 0.1mol/L柠檬酸溶液混合而成。若将pH 4的缓冲液再调至pH 6.2，可在pH 4的缓冲液中加入9.37mL 0.2mol/L Na2HPO4溶液和0.63mL 0.1mol/L柠檬酸溶液混合液。

表1 磷酸氢二钠-柠檬酸缓冲液配制及回调

1.2 实验用具 量筒、烧杯、玻璃棒、试管及试管架、移液枪、滴管、水浴锅、点滴板、电磁炉、pH计等。

1.3 检测方法 KI-I2溶液鉴定方法：用滴管吸取反应液和KI-I2溶液各1滴至点滴板上，观察颜色的变化；斐林试剂鉴定方法：取适量斐林试剂1mL加入含有反应液的试管中，60℃水浴5min。……