杨凤华

(江苏省口岸中学 225321)

人教版高中生物学教材选修1中介绍了用平板划线法纯化大肠杆菌。以下是对该实验在教学过程中遇到的几个问题的思考。

1 为什么在操作的每一步前后都要灼烧接种环

操作开始时灼烧接种环，是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线之前灼烧接种环，是为了杀死上次划线结束后接种环上残留的菌种，使下一次划线时接种环上的菌种直接来自上次划线的末端，通过划线次数的增加而使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落；划线结束后灼烧接种环，及时杀死接种环上残留的菌种，防止污染环境和感染操作者。

2 如何让初学者在划线无痕的平板上确定5个区域

由于平板冷却凝固之后，是倒过来放置的，正好使得皿盖在下皿底在上。可以在皿底的背面用记号笔将平板分成面积不等的5个小区域(图1)，第1区面积最小，作为待分离菌的菌源区；第2、3、4区是逐级稀释的过渡区；第5区则是关键区，通过划线操作使该区出现大量的单菌落以供挑选纯种用。平板上5个区面积的分配应是5>4>3>2>1。待到划线接种时，操作者就可以将接种环沿着记号的顺序和位置进行划线，这样既能保证第2、3、4、5次划线都是从上一区域的末端开始，而且第5区域和第1区域不相连，又能便于充分利用整个平板的面积，得到较多的典型单菌落。

图1 平板划线的5个区域

3 为什么要将平板倒置放入培养箱中培养

①倒置培养能很大程度减少外来微生物的侵染；②培养过……