苏秋东 郭敏卓 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 高燕 毕胜利 伊瑶

102206中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室（苏秋东、邱丰、贾志远、卢学新、孟庆玲、田瑞光、高燕、毕胜利、伊瑶）；100026北京出入境检验检疫局保健中心（郭敏卓）

自发生物素化风疹病毒重组诊断抗原的制备

苏秋东 郭敏卓 邱丰 贾志远 卢学新 孟庆玲 田瑞光 高燕 毕胜利 伊瑶

102206中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所肝炎室（苏秋东、邱丰、贾志远、卢学新、孟庆玲、田瑞光、高燕、毕胜利、伊瑶）；100026北京出入境检验检疫局保健中心（郭敏卓）

目的 获取原核表达过程中自发生物素化的风疹病毒（Rube11a Virus，RV）重组抗原E1（RV-E1），并初步评价其抗原性。方法 将2×BirA酶底物（BSP）插入到RV-E1抗原优势表位区域aa 148-295的羧基端，硫氧还蛋白（Thioredoxin，TRX）插入到RV-E1的氨基端，密码子优化后全基因合成；在大肠埃希进行表达，并利用亲和层析和离子交换层析纯化获取生物素化的RV-E1抗原；利用Western B1otting技术对目的蛋白进行鉴定，并建立风疹病毒IgM抗体检测方法，初步评价此方法对阴阳血清样本的鉴别能力。结果 获取高度均质的生物素化的可溶性RV-E1抗原，WB实验表明目的蛋白不但可以被RV-E1抗原和TRX抗原单克隆抗体识别，而且可以被标记HRP的链霉亲和素所识别。分别对50份风疹病毒感染阳性血清、阴性血清和健康人血清进行检测，发现一致性优异。结论 RV-E1诊断抗原携带BSP，可以在大肠埃希菌表达过程中自发共价结合生物素分子，并可以作为新型诊断抗原应用于生物素-亲和素ELISA血清学检测中。……