王利静 刘林 李建东 李伟红 张硕 梁米芳 李德新

102206北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

基于核酸杂交的病毒基因组特异性纯化富集方法的初步研究

王利静 刘林 李建东 李伟红 张硕 梁米芳 李德新

102206北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所

目的 探索实验室高通量检测前临床样本中病毒核酸特异性纯化富集的方法。方法

以负链RNA病毒发热伴血小板减少综合征病毒（SFTSV）为模拟样本，针对病毒基因组S、M和L三个片段设计杂交探针，并进行5'端生物素修饰，与链霉亲和素修饰磁珠共价结合，纯化样本中SFTSV核酸，比较研究特异性纯化富集对样本二代测序效果的影响。结果 cDNA文库制备时全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化均较不开展富集纯化有显著改善，有效数据比例分别为5.57%、6.39%、2.71%，差别具有显著性（χ2=9 799.8，P＜0.001）。对全转录组扩增前或后进行特异性富集纯化对测序结果进行比较分析时发现，扩增后进行纯化优于扩增前（P＜0.001）。结论 基于核酸杂交的病毒基因组特异性富集纯化方法可有效降低二代测序中背景值，提高测序效率，具有高通量检测前特异性纯化富集样本的作用。

【主题词】 病毒基因组；纯化；富集；二代测序

Fund programs：China Mega-Project for Infectious Diseases Grants from the Ministry of Science and Techno1ogy and the Ministry of Hea1th：Emergency response and detection p1atform construction for infectious disease（2013ZX10004-101）

基因组高通量测序即二代测序技术（Next-Generation sequencing techniques，NGS）在病原体筛查鉴定以及基因组信息相关的研究方面应用日趋广泛，具有高分辨率、高敏感性和高准确性等优点［1］。病毒基因组高通量测序前样本处理及cDNA文库构建一般采用基于随机引物的扩增技术［2-3］建库提高二代测序技术的病原体筛查检测效率，需要在测序前的样本处理、测序过程以及序列结果分析等方面进行优化完善。……