邹晓辉 赵翔 冯兆民 王大燕 舒跃龙

102206北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心，卫计委医学病毒和病毒病重点实验室

两种等温扩增技术在二代测序病毒鉴定中的应用

邹晓辉 赵翔 冯兆民 王大燕 舒跃龙

102206北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所国家流感中心，卫计委医学病毒和病毒病重点实验室

目的 评估两种等温扩增方法在二代测序（Next generation sequencing，NGS）病毒鉴定中的应用，为利用二代测序进行病毒鉴定提供参考。方法 选取了两份病原已知的重症肺炎病人咽拭子，分别采用单引物等温扩增（Sing1e primer isotherma1 amp1ification，SPIA）和多重置换等温扩增（Mu1tip1e disp1acement amp1ification，MDA）的方法进行反转录扩增。扩增产物进行NGS测序和宏基因组学分析。结果 SPIA扩增产物片段较短，扩增效率较低；而MDA扩增的产物片段较长，扩增效率也高。SPIA法在两份样本中均检测到目标病原，且目标病原基因组覆盖度较高。MDA在其中一份样本中未能检测出目标病原。结论 SPIA与MDA扩增方法均可用于NGS病原鉴定。SPIA法扩增效率较低，成本较高，但检测病原的能力高于MDA。

【主题词】 等温扩增；下一代测序；病原鉴定

Fund program：Chinese Nationa1 Key Program of Mega Infectious Disease of the Nationa1 12th Five-Year P1an（2014ZX10004002）

近年来，下一代测序技术（Next generation sequencing，NGS）得到了飞速发展，极大的促进了其在公共卫生领域的应用［1］。NGS技术结合高灵敏度的核酸扩增，可以极大的提高临床实验室发现病原的能力。目前，NGS越来越多的用于临床实验室病原鉴定，并取得了一系列成果［2］。NGS技术已经成为临床病原鉴定的一种重要技术手段，得到了各个国家的高度重视［3］。

单引物……