敖元云 虞结梅 周冬梅 靳淼 李莉莉 段招军

100052北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所腹泻室

GIV诺如病毒荧光定量一步RT-PCR方法的建立

敖元云 虞结梅 周冬梅 靳淼 李莉莉 段招军

100052北京，中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所腹泻室

目的 建立灵敏、特异的GIV诺如病毒的荧光定量检测方法。方法 合成针对GIV诺如病毒的特异性引物以及Taqman探针，优化反应体系及条件，根据我国新发人GIV诺如病毒序列（GenBank序列号：KC894731）构建荧光定量检测的RNA标准品，对其灵敏度、特异性、重复性进行评估，以传统逆转录-聚合酶链反应（Reverse transcription-po1ymerase chain reaction，RT-PCR）的方法作为参考评价。结果 该方法检测的灵敏度可以达到1.0×102拷贝/μ1，检测范围为102～108拷贝/ μ1；与GI、GII诺如病毒、肠道腺病毒、轮状病毒、星状病毒等无交叉反应；批内和批间重复性实验的循环阈值（Ct）变异系数（CV）分别小于1.31%和3.68%；在阳性粪便标本的对比检测中发现，该方法与普通RT-PCR相比具有灵敏度高、能够定量的优势。结论 本研究建立的检测GIV诺如病毒的荧光定量一步RT-PCR法，可应用于GIV诺如病毒的检测。

【主题词】 诺如病毒；GIV；荧光定量

诺如病毒（Norovirus，NoV）是单股正链、无包膜的RNA病毒，属于杯状病毒科诺如病毒属，是引起全世界所有人群非细菌性胃肠炎的主要病原体之一［1］。根据诺如病毒衣壳区的核苷酸序列，将NoV分为5个基因组（genogroup，G），GI-GV，感染人的包括GI、GII和GIV，而GIII和GV分别感染牛和鼠。GIV进一步分为两个基因型，感染人的GIV.1型和感染动物的GIV.2型［2］。GI和GII是诺如病毒引起胃肠炎暴发最常见的两个遗传组［3-4］，而GIV引起暴发的报道却是很少见，我国目前未见有关GIV NoVs报道。……