崔冬冰 范安然 何志旭,2* 舒莉萍

1.贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心(贵阳，550004);2.贵州医科大学附属医学院儿科学教研室;3.贵州医科大学免疫学教研室

·基础研究·

人羊膜间充质干细胞体外传代培养对染色体核型的影响

崔冬冰1范安然1何志旭1,2*舒莉萍3

1.贵州医科大学组织工程与干细胞实验中心(贵阳，550004);2.贵州医科大学附属医学院儿科学教研室;3.贵州医科大学免疫学教研室

目的：分离培养人羊膜间充质干细胞(hAMSCs)并进行体外长期传代培养，通过对连续传代的细胞形态、膜表面标志、增殖、分化特性以及染色体核型进行研究，以观察体外培养对该细胞的影响，为其储备和临床应用提供实验依据。方法: 无菌条件下从新鲜人胎盘组织分离羊膜，采用组织贴壁法分离培养hAMSCs，并对原代细胞～P11代细胞利用流式细胞技术检测其膜表面标志物；取P3～P4代细胞向神经细胞和成骨细胞诱导，免疫组化染色、PCR检测基因表达情况；采用染色体G显带法制备染色体核型。结果： hAMSCs形态似长梭型，呈流水状生长，细胞活性高，冻存复苏后仍能保持正常形态，并可在体外稳定扩增，细胞生长曲线呈“S”型; 细胞高表达CD90、CD73、CD44、CD105；细胞经诱导后可以向神经细胞和成骨细胞分化，神经元特异性烯醇化酶和成骨细胞矿化结节检测为阳性，PCR检测巢蛋白和骨桥蛋白基因表达为阳性； P3～P10代的hAMSCs染色体核型均为正常二倍体核型。结论：hAMSCs在体外经数代培养后能保持间充质干细胞的外显和遗传特性，并且未见染色体核型异常改变。……