李荣富　高广周　孙　涛　王志红



·基础研究·

骨髓间充质干细胞在溃疡性结肠炎小鼠模型结肠的定位

李荣富高广周孙涛王志红

230032合肥市第二人民医院消化内科(李荣富，王志红)；100048北京，海军总医院消化内科(高广周，孙涛)

溃疡性结肠炎(UC)是一种病因和发病机制尚不清楚的慢性肠道炎性疾病，近年来UC的患病率呈明显升高趋势，有报道约为11.6/10万[1]，目前缺乏有效的治疗方法。1996年Tyndall等[2]用异体造血干细胞移植治疗白血病合并UC患者时，发现其对白血病起治疗作用的同时，也明显改善了UC的症状，这为UC的治疗方法研究提供了新的思路。目前干细胞移植用于UC的治疗是国内外相关领域研究的热点之一。本研究旨在探讨骨髓间充质干细胞(BMSC)在小鼠远端结肠的定位情况，为干细胞移植治疗UC的实验研究提供理论基础。

1材料与方法

1.1实验动物

健康BALB/c小鼠，雌性(8周龄)30只，雄性(3周龄)4只，购自军事医学科学院实验动物中心，许可证号：SCXK-(军)2007-004，饲养于海军总医院实验动物中心SPF级动物实验室。

1.2主要试剂及仪器

DMEM/F12培养基(Thermo)；PE标记小鼠抗人CD44、CD34、CD45、CD90抗体(Biolegend)；葡聚糖硫酸钠(MP Biomedicals)；兔抗SRY蛋白单抗(Sigma)；细胞培养箱(Thermo Forma)；倒置荧光显微镜(Nikon)。

1.3BMSC的分离培养及鉴定

脱臼处死雄性小鼠，无菌条件下分离胫骨及股骨，暴露骨髓腔，用培养液冲洗骨髓腔，收集后过滤离心，1000 r/min离心5 min，弃上清液后用培养液重悬细胞，37 ℃，5% CO2饱和湿度下培养。72 h首次换液，细胞繁殖长满瓶底90%时，按1∶2比例传代。细胞培养过程中逐日观察细胞贴壁特性及形态。并利用流式细胞仪检测P3代细胞CD34、CD44、CD45、CD90的表达情况。……