任志浩，房立春，栾怀彪，李　阳，王一新，崔治中，常　爽，赵　鹏

(山东农业大学动物医学院，泰安 271018)



鸡传染性贫血病毒荧光定量PCR检测方法的建立及其在疫苗污染检测中的应用

任志浩#，房立春#，栾怀彪，李阳，王一新，崔治中，常爽*，赵鹏*

(山东农业大学动物医学院，泰安 271018)

摘要：为了更快速而灵敏地检测禽弱毒疫苗中鸡传染性贫血病毒(CIAV)的污染，根据CIAV基因组保守序列设计合成了引物及TaqMan探针，通过优化反应条件建立了快速检测CIAV的实时荧光定量PCR检测方法。结果显示，建立的检测方法灵敏度可达10拷贝·μL-1，比常规PCR灵敏度高100倍。该方法与禽白血病病毒、禽网状内皮组织增生症病毒以及马立克病病毒等病毒基因均无交叉反应，具有很好的特异性；批内重复和批间重复显示变异系数均小于2%，呈现良好的可重复性。在模拟试验中，该方法能够检测到1 000羽份弱毒疫苗中1个EID50的低剂量污染，应用该方法从送检的39种(批)商品化禽用弱毒疫苗中检测到2份为CIAV阳性。上述结果表明，本研究建立的荧光定量PCR检测方法灵敏度高，特异性强，重复性好，可用于检测疫苗中CIAV低剂量的污染。

关键词：鸡传染性贫血病毒；实时荧光定量PCR；弱毒疫苗；污染

鸡传染性贫血病毒(chicken infectious anemia virus，CIAV)可引起雏鸡骨髓造血组织和胸腺等淋巴组织的萎缩，并导致感染鸡发生贫血和免疫抑制。自1979年日本学者首次报道CIAV以来[1]，CIAV感染已在我国及其他国家普遍存在[2-6]。由于CIAV感染非常普遍并可以通过种蛋垂直传播，在养禽场(特别是种禽场)中受到高度重视。……