曾庆宝，范瑞文，张秋月，郝晓娟，武良琦，任玉红

(山西农业大学动物科技学院，太谷 030801)



miR-324-3p通过调控MC1R基因影响黑色素的形成

曾庆宝，范瑞文，张秋月，郝晓娟，武良琦，任玉红*

(山西农业大学动物科技学院，太谷 030801)

摘要：旨在证明miR-324-3p可以通过调控其预测的靶基因MC1R及其下游基因的表达从而对羊驼皮肤黑色素的合成产生影响。本研究在体外培养的羊驼皮肤黑色素细胞中转染miR-324-3p过表达载体，应用qRT-PCR与Western blotting分析比较各试验组中MC1R基因与毛色相关基因小眼畸形相关转录因子(Microphthalmia-associtated transcription factor，Mitf)、酪氨酸酶(Tyrosinase，Tyr)、酪氨酸相关蛋白2(Tyrosinase related protein 2，Tyrp2)的表达差异性，利用酶标仪检测黑色素产量的变化。结果显示：(1)miR-324-3p在棕色与白色羊驼皮肤中均有表达，且在棕色羊驼皮肤中极显著表达(P<0.01)，其相对表达量是白色的1.64倍；(2)黑色素细胞被转染了miR-324-3p过表达载体后，处理组靶基因MC1R及其下游调控基因Mitf、Tyr和Tyrp2的表达量与黑色素产量较空白对照组均有下调，且以Mitf基因表达量极显著下调(P<0.01)。综上表明，羊驼皮肤中miR-324-3p可能通过调控MC1R基因的表达，顺势下调MC1R基因下游调控基因Mitf、Tyr与Tyrp2的表达，最终对羊驼皮肤黑色素细胞中黑色素的类型及合成量产生影响。

关键词：miR-324-3p；MC1R；黑色素；羊驼

动物拥有丰富多彩的毛色，决定动物毛色的物质基础主要是酪氨酸源性黑色素，在动物界黑色素有两种类型，一种是真黑素，另一种是伪黑素，正是这些色素分布与合成数量的不同造就了动物不同的毛色[1]。黑色素的生物合成主要受到基因(主控基因及调控基因)与环境因素的影响，已有研究报道，黑素皮质激素受体1(Melanocortin-1 receptors，MC1R)基因被视为影响动物黑色素细胞合成的主控基因之一，其表达于成熟黑色素细胞膜表面，作为G蛋白偶联受体(GPCR)家族的一员，有7个跨膜功能域，当与其天然配体激动剂α-黑素细胞刺激素(α-melanocytes stimulating hormone，α-MSH)相结合后，顺式上调黑色素合成的关键酶—酪氨酸酶基因家族(Tyr、Tyrp1、Tyrp2)基因的表达，进而增加黑色素细胞内真黑素的相对含量[2]，而Agouti蛋白可竞争性结合MC1R，导致MC1R受体通路传递信号减弱，促使黑色素细胞相对大量合成伪黑素。……