耿红红，张敬旸，李　莲，王根林

(南京农业大学 动物科技学院，南京 210095)



RNA-seq转录组测序分析不同季节对槟榔江水牛精液品质的影响

耿红红，张敬旸，李莲，王根林*

(南京农业大学 动物科技学院，南京 210095)

摘要：本研究旨在利用RNA-seq技术对不同季节槟榔江水牛全血mRNA进行分析，找出不同季节精液品质候选基因。选取5头生长状况相近的3～5岁槟榔江水牛，进行春、夏、秋、冬4个季节的精液品质(鲜精活力、精子畸形率、射精量、精子密度)检测。根据精液品质，选取差异极显著的春(BL)、夏(SBL)两个季节的水牛样品进行RNA-seq转录组测序分析。颈静脉采集全血，抽提mRNA并组内混合制样，利用RNA-seq技术分析不同季节槟榔江水牛全血mRNA差异表达。根据差异倍数>1.5，P<0.05的标准进行筛选，得到差异基因，再利用DAVID 6.7软件对差异基因进行GO和KEGG分析，通过RT-PCR验证基因芯片结果的准确性。结果表明：差异表达基因84个，其中上调基因56个，下调基因28个；GO分析发现，这些差异基因与应激反应、免疫反应有关；KEGG分析表明，差异基因显著富集到肿瘤坏死因子(TNF)和T细胞受体信号通路。其中，神经营养因子受体类似物死亡结构域(NRADD，又叫热休克蛋白因子1 (HSF1))、原癌基因FOS和JUN，与精液品质相关性强，可作为进一步研究的靶基因。

关键词：RNA-seq；槟榔江水牛；差异表达基因；精液品质

槟榔江水牛(Betelnut-jiang buffalo)是中国发现唯一的河流型水牛，主产于腾冲槟榔江上游，槟榔江水牛体型较小，饲料消耗较低，而且产奶量相对较高，牛奶营养丰富，是比较好的乳用品种。当前，人工授精技术及冷冻精液的日益普及，具有优良性状的种公牛越来越受到重视。槟榔江水牛作为改良产奶量低的沼泽型水牛的优良父本，探讨其遗传优势有现实意义。

种公牛的精液品质受到季节、品种、年龄、营养和饲养水平等要素的影响，其中季节变化，尤其是温度湿度的变化对精液品质的影响最为显著。研究表明，牲畜自身的生理状态和精子发生需要一个适宜的外界环境作为保障[1]。季节变化中夏季温度较高时会极大的影响公牛的精液品质和生产效益[2-3]。衡……