段新崇，魏彦辉，李　阳，李相运，周荣艳，锡建中

(河北农业大学动物科技学院，保定 071001)



小尾寒羊间情期和发情期microRNAs差异表达分析

段新崇，魏彦辉，李阳，李相运，周荣艳*，锡建中

(河北农业大学动物科技学院，保定 071001)

摘要：本研究通过构建和分析小尾寒羊间情期和发情期卵巢组织microRNA(miRNA)表达谱，筛选两个时期差异表达的microRNAs，为研究microRNA调控小尾寒羊繁殖过程提供相应的理论基础。利用活体手术法在发情期(第1天)和间情期(第13天)分别采集一侧卵巢。从卵巢中提取总RNA，利用illumina Hiseq2000测序平台获取RNA数据，对表达谱和差异表达microRNAs进行生物信息学分析。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)验证差异表达的microRNAs在小尾寒羊卵巢中表达水平。结果，成功地构建出小尾寒羊间情期和发情期microRNA的表达谱，oar-miR-99a和oar-miR-143分别是间情期和发情期表达量最高的microRNA，并筛选出在两个时期间3个显著差异表达的microRNAs，分别为oar-miR-200a、oar-miR-200b和oar-miR-200c。利用qRT-PCR对随机选择的2个显著差异表达的microRNAs进行验证，其表达水平和RNA-Seq分析结果一致。microRNA表达谱为后续的绵羊卵巢microRNA研究提供更详尽的信息。结合靶基因预测及通路富集分析，推测差异表达的microRNAs是通过代谢和免疫途径调控卵巢周期性活动。

关键词：小尾寒羊；间情期；发情期；卵巢；microRNA

microRNA是一类长约22个核苷酸的非编码单链RNA分子，在哺乳动物的卵巢、输卵管、子宫、胎盘等繁殖组织器官中广泛表达[1-3]。它通过与靶mRNA特异性碱基互补配对，引起靶mRNA降解或者抑制其翻译，发挥基因转录后水平调控作用，从而参与细胞分化、增殖、凋亡等一系列生物学过程，而这些生物学过程正是卵泡发生、排卵以及黄体生成所必须的过程[4]。……