舒磊磊，甲芝莲，吴勇浒，索　伦，贾丽玲*

(1.上海交通大学生命科学技术学院，上海 200240；2.上海交通大学系统生物医学研究院，上海 200240；3.上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)



CRISPR/Cas9技术的应用性研究

舒磊磊1，甲芝莲2，吴勇浒2，索伦3*，贾丽玲2*

(1.上海交通大学生命科学技术学院，上海 200240；2.上海交通大学系统生物医学研究院，上海 200240；3.上海交通大学医学院附属第九人民医院，上海 200011)

摘要：旨在探索CRISPR/Cas9技术的新应用，本研究通过在小鼠遗传操作(Genetic manipulation)中使用该技术，创建了一种在活体组织内研究基因功能的方法。通过胚胎电转、免疫组化和PCR分析等手段，结果发现，针对DCX基因进行编辑，再现了DCX下调导致神经元迁移障碍的表型，说明该技术能够用于小鼠遗传操作中下调基因表达；其次，该技术还成功应用于Pcdhα基因簇的编辑并研究了基因簇恒定区的功能；最后，通过基因型鉴定发现，胚胎电转中使用CRISPR/Cas9会导致目的基因的敲除、反转和重复事件的发生。综上所述，在小鼠胚胎电转中使用CRISPR/Cas9技术，能够成功编辑目的基因，从而实现活体组织内研究基因的在体功能。

关键词：CRISPR/Cas9；遗传操作；基因敲除；基因反转；基因重复

CRISPR/Cas9是一种RNA指导的DNA内切酶，依靠RNA-DNA的互补识别并切割特异基因序列从而达到精确的基因组编辑和基因修饰的目的。该技术自面世以来已经改变了生物领域的科研面貌，并迅速发展为实验室的一种常规试验手段。其已成功应用于细菌、人类细胞、斑马鱼、小鼠、猪、食蟹猴以及多种植物的基因组精确修饰，是最具有临床与应用前景的基因治疗技术之一[1]。……