高植明（珠海市人民医院药学部　珠海　519000）

黄芪提取物对IgAN患者IgA1异常糖基化的作用及其分子机制研究△

高植明（珠海市人民医院药学部珠海519000）

目的：考察黄芪提取物对IgAN患者IgA1异常糖基化的作用及其分子机制研究。方法：本研究通过分离培养IgA肾病患者和非IgA肾病对照者的外周血淋巴细胞，运用免疫组化结合分子生物学手段，研究黄芪提取物对IgA1异常糖基化的调节作用及其作用机制。结果：在IgAN患者的外周淋巴细胞上清液内，黄芪提取物组的IgA1异常糖基化程度显著降低（P＜0.05），Cosmc mRNA表达水平显著提升（P＜0.05）。结论：黄芪提取物在体外实验中表现出降低IgAN患者IgA1异常糖基化程度的能力，其机制可能与之调节Comsc的基因表达有关。

黄芪提取物 IgA肾病 异常糖基化 分子机制

IgA肾病是1968年首次报道的肾病类型，患者血清、扁桃体以及肾脏组织中均可发现IgA1分子链区糖链结构异常，是导致肾脏衰竭的最常见原因之一。当前针对IgA肾病还没有常规的临床药物，尤其是针对IgA1异常糖基化作用的药物研究较少。黄芪是用于肾病辅助治疗的草本植物，研究显示，黄芪对于IgA肾病中的IgA1异常糖基化具有调节作用。本文从临床角度对黄芪活性成分对IgA1异常糖基化的作用进行研究，探讨可能的分子机制。

1资料与方法

1.1临床资料：以2012年3月～2013年3月在我院肾内科收治的11例IgA患者为研究组进行研究，其中男性6例，女性5例，年龄23～45岁，平均年龄（31.5±3.5）岁，经过肾穿刺免疫荧光以及病理学检查确诊为IgA肾病，病程为3个月～2年。排除标准：①肝肾功能不全者；②糖尿病肾病，狼疮性肾炎等继发性肾病患者；③酗酒或滥用药物，以及精神异常者。以同时期的11例非IgA肾病患者为对照组，其中男性7例，女性4例，平均年龄（23.5±2.8）岁，患者肾功能正常，均无血尿和蛋白尿。研究组与对照组在性别构成比、血清白蛋白、尿素氮等资料上差异无统计学意义（P＞0.05），研究组的年龄、蛋白尿均高于对照组，差异具有统计学意义（P＜0.05）。研究组与对照组均了解研究内容，并且要求签署知情同意书。

1.2药品与试剂：黄芪提取物（黄芪多糖、黄芪总皂苷、黄芪总黄酮，自提取），试剂盒（AL，USA），小牛血清；RNA提取试剂（Trizol，Invitrogen公司），反转录酶系、Taq酶系（北京索奥公司），焦碳酸二乙酯（DEPC，美国Sigma公司），三磷酸碱基脱氧核苷酸（dNTPs，上海生物工程公司），RNA酶抑制剂（RNasin，美国Promega公司）。

1.3方法：采用血清样本复孔中的吸光度值均值，测试IgA1浓度与糖基化水平。采用荧光定量PCR反应测定β-1，3半乳糖基转移酶及其伴侣分子Cosmc mRNA水平。

目标引物：β1，3GT上游5’-GGC TCA CAG CCA GTA GGC ATA-3’；下游5’-GCT GCC CAC CAG ATT CTG A-3’；Cosmc上游5’-CTA GAC GCG GAT GAA GTG CAA-3’；下游5’-CCA ATG GAA TCT GAT TAC TGT TTG G-3’；GAPDH上游5’-GAA GGT GAA GGT CGG AGT C-3’；下游5’-GAA GAT GGT GAT GGG ATT TC-3’；

探针：β1，3GT 5’FAM-AGC GGG AAT GAA AAT CGA GC A C-T AMARA-3’；Cosmc 5’FAM-ACT TCT CCA TAG AGG AGT TGT TGC AA-TAMARA-3’；GAPDH5’FAM-CAA GCT TCC CGT TCT CAG CC-TAMRA-3’。

1.4统计学方法：将数据输入SPSS19.0进行统计分析，组间比较采用t检验，P＜0.05为差异具有统计学意义。

2结果

2.1研究组与对照组结果比较

表1 IgA肾病患者和非IgA肾病患者外周血淋巴细胞培养上清液IgA浓度与糖基化程度比较

2.2 IgA肾病患者和正常人外周血淋巴细胞培养上清液β1，3GT mRNA和Cosmc mRNA表达水平

表2 IgA肾病患者和非IgA肾病患者外周血淋巴细胞培养上清液β1，3GT mRNA与上清液Cosmc mRNA表达水平（±s，n=11）

表2 IgA肾病患者和非IgA肾病患者外周血淋巴细胞培养上清液β1，3GT mRNA与上清液Cosmc mRNA表达水平（±s，n=11）

注：与对照组相比，*P＜0.05；与空白组相比，△P＜0.05。

组别　　β1，3GT mRNA Cosmc mRNA空白组　　黄芪提取物组　　空白组　　黄芪提取物组研究组　0.80±0.20　0.78±0.11　0.78±0.16　0.98±0.29△对照组　0.76±0.13　0.79±0.22　0.97±0.23　1.01±0.17

3讨论

人体IgA有两个亚类：IgA1和IgA2。IgA1的糖基化缺陷导致其自身聚集或与其他糖蛋白分子形成大分子复合物而沉积在肾小球系膜区，引起系膜细胞和基质增生，最终导致IgA肾病。糖基化酶异常，IgA过量合成是低糖基化IgA分子形成的主要原因。本文的研究显示，采用黄芪提取物能够对IgA1的异常糖基化程度进行抑制，检测药物干预后外周血淋巴细胞CIGALT1的活性和Cosmc mRNA的表达水平可知，IgA肾病患者的用药组和空白组中的β-1，3GTmRAN表达没有显著差异，黄芪提取物的Cosmc mRNA的表达水平与空白组相比有显著提高（P＜0.05），因此可以推断，黄芪提取物可能是通过提高β-1，3GT的伴侣蛋白Cosmc的表达，从而起到对IgA异常糖基化的调节作用。

［1］谢林伸，王立，黄俊，等.IgA肾病中IgA1异常糖基化的致病机制［J］.生物医学工程学杂志，2010，27（1）：221-228.

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△本文是珠海市医学科研课题（No.2014098）支持。

Research of the regulation effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 of lgA nephrosis patient and its mechanism

Gao Zhiming（Zhuhai People's Hospital，Guangdong Zhuhai 519000，China）

Objective：To investigate the effect of Astragalus extract on abnormal glycosylation of IgA1 in IgAN patients and its mechanism.Methods：In this study，peripheral blood lymphocytes in IgAN and non-IgAN patients were isolated and cultured，and we tried to found out whether and how Astragalus extracts could regular abnormal glycosylation of IgA1 by immunohistochemistry and molecular biology.Results：In IgAN patients，the degree of abnormal glycosylation of IgA1 in Astragalus extracts group reduced significantly（P＜0.05），while Cosmc mRNA levels rose significantly（P＜0.05）.Conclusion：In vitro experiments，Astragalus extracts could reduce the degree of abnormal glycosylation of IgA1 in IgAN patients，which might probably have something to do with increasing Comsc gene expression.

Astragalus extract IgA nephropathy Abnormal glycosylation Molecular mechanisms

R965

B

1672-8351（2016）08-0115-02