张海涛　吕　颖　齐向群　李旻辉（.赤峰市药品检验所　赤峰　024005；2.包头医学院　包头　04040）

高效液相色谱法测定蒙药制剂浩森布如-13中胡椒碱的含量

张海涛1吕颖1齐向群1李旻辉2*（1.赤峰市药品检验所赤峰024005；2.包头医学院包头014040）

目的：建立高效液相色谱法测定蒙药制剂浩森布如-13中胡椒碱的含量。方法：采用DiamonsiL C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以甲醇-水（77∶23）为流动相；流速1.0mL·min-1；检测波长343nm；柱温为30℃。结果：胡椒碱在4～40μg·mL-1（r=0.9999）范围内线性关系良好；平均回收率为98.19%（n=9），RSD为0.86%。结论：本方法简便准确、稳定可靠，可用于蒙药制剂浩森布如-13的胡椒碱含量测定。

蒙药制剂 高效液相色谱法 浩森布如-13胡椒碱 含量测定

蒙药制剂浩森布如-13散剂，主要由石榴、肉桂、肉豆蔻、荜茇、白胡椒、白巨胜、光明盐等十三味药组成，具有助消化止泄的功效，蒙医主要用于治疗胃巴达干病、寒性泻等。其中荜茇、白胡椒为臣药，主要含有胡椒碱（piperine）、丁香烯（caryophylene）、胡椒酰胺（pipercide）等化学成分［1］。胡椒碱作为主要活性成分之一，化学结构属于桂皮酰胺类，不仅具有抗溃疡［2］、抗氧化［3］、免疫调节及抗肿瘤［4］的作用，而且在众多研究中，作为生物利用度增强剂［5］的应用越来越引起人们的重视。本研究采用高效液相色谱法测定浩森布如-13中胡椒碱的含量，对有效控制和评价产品质量，具有重要的应用价值。

1仪器与试药

美国沃特世（Waters）高效液相色谱仪（Waters2695泵，Waters2487紫外检测器，Empower色谱工作站），岛津UV-2600型紫外-可见分光光度计，瑞士Precisa型十万分之一电子天平，昆山舒美KQ-500DE型数控超声波清洗机。

胡椒碱对照品（批号：0775-200203，供含量测定用），由中国食品药品检定研究院提供；甲醇为色谱纯，水为高纯水，其他试剂为分析纯；浩森布如-13散剂（2.5g/袋，一次1袋，一日1次），阿拉善盟蒙医医院自制制剂。

2方法与结果

2.1溶液的制备

2.1.1对照品溶液的制备：精密称取胡椒碱对照品约10mg，置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇溶解、定容、摇匀，制成约200μg·mL-1的胡椒碱对照品储备液。精密吸取胡椒碱对照品储备液2.5mL，置50mL棕色量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。

2.1.2供试品溶液的制备：取浩森布如-13样品约0.2g，精密称定，置50mL棕色量瓶中，加入无水乙醇40mL，超声处理（功率250W，频率50kHz）30min，放置至室温后，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得。

2.1.3阴性样品溶液的制备：按处方比例制备不含荜茇、白胡椒的阴性样品，按“2.1.2”项下方法制备操作，即得。

2.2色谱条件与系统适用性试验：色谱柱：DiamonsiL C18（250mm×4.6mm，5μm）；流动相：甲醇-水（77∶23）；流速：1.0mL· min-1；检测波长：343nm；柱温：30℃；进样量：10μL。理论板数按胡椒碱峰计算不低于5000。分别精密吸取胡椒碱对照品溶液、供试品溶液及阴性样品溶液各10μL，在上述色谱条件下进样测定，色谱图见图1。

2.3方法学考察

2.3.1线性关系考察：精密吸取胡椒碱对照品储备液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0mL，分别置25mL棕色量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。分别取上述溶液10μL，注入液相色谱仪，记录胡椒碱色谱峰面积。以胡椒碱峰面积为纵坐标（Y），浓度为横坐标（X），进行线性回归，得线性方程为Y=7.376×104X-2.336×103，r＝0.9999（n=9）。结果表明胡椒碱进样浓度在4～40μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。

2.3.2精密度试验：精密吸取“2.1.1”项下对照品溶液10μL，按“2.2”项下色谱条件，连续进样6次，测定峰面积，计算胡椒碱峰面积的RSD（n=6）为0.40%，表明仪器精密度良好。

2.3.3稳定性试验：精密吸取“2.1.2”项下同一供试品溶液10μL，分别于0，2，4，8，12，18，24h进样测定，测得胡椒碱峰面积的RSD（n=7）为0.56%。结果表明，供试品溶液在24h内稳定性良好。

2.3.4重复性试验：称取同一样品6份，每份约0.2g，精密称定，分别按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，进样测定。结果胡椒碱含量的RSD为0.40%，表明重复性良好。

2.3.5加样回收率试验：精密称取已知含量的同一样品9份，每份约0.08g，精密称定，分别置50mL棕色量瓶中，分别加入胡椒碱对照品储备液0.5，1.0，1.5mL，各3份，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，分别进样10μL，结果见表1。

表1胡椒碱加样回收试验

2.4样品测定：按上述建立好的方法对浩森布如-13进行含量测定，结果见表2。代表性样品色谱图见图1（B）。

表2浩森布如-13样品测定结果（X=X均±S，n=3）

3讨论

本实验通过对流动相、检测波长、样品超声提取时间等条件的筛选，建立了浩森布如-13中胡椒碱含量的测定方法，比较了流动相甲醇-水［6］不同比例（60∶40；70∶30；75∶25；77∶23；80∶20；90∶10）等度洗脱时色谱峰的分离效果，结果甲醇-水的比例为77∶23时，所得色谱图基线平直，各组分之间可以得到较好分离，峰形良好，保留时间适宜；对胡椒碱对照品溶液在200～700nm波长范围内扫描，胡椒碱在343nm波长处有最大吸收，故选择343nm为检测波长；分别考察了样品超声处理20min、30min和40min的提取量，结果表明超声处理20min时提取不完全，30min与40min的提取量无明显变化，故选择30min作为超声处理时间。

根据胡椒碱的光稳定性研究，避光条件下更有利于胡椒碱的稳定和保存［7］，故在实验操作中使用棕色量瓶，以避免其由于分解而影响结果准确性。

本实验建立的HPLC测定蒙药制剂浩森布如-13中胡椒碱含量的方法操作简单，灵敏度高，重现性好，结果准确，适用于浩森布如-13蒙药制剂的质量控制。

［1］国家中医药管理局《中华本草》编委会.中华本草［M］.蒙药卷，上海：上海科学技术出版社，2004：274-275.

［2］Morikawa T，Matsuda H，Yamaguchi I，et al.New amides and gastroprotective constituents from the fruit of Piper chaba［J］.Planta Med，2004，70：152-159.

［3］Price S E，Harris S A D，Deborah J，et al.Piperine，an active ingredientofblack pepperattenuatesacetaminopheninduced hepatotoxicity in mice［J］.Asian Pacific Journal of Tropical Medicine，2010，3（12）：971-976.

［4］Sunila E S，Kuttan.G.Immunomodulatory and antitumor activity of Piper longum Linn and piperine［J］.Journal of Ethnopharmacology，2004，90（2-3）：339-346.

［5］Kasibhatta R，Naidu M U R.Influence of piperine on the pharmacokinetics of nevirapine under fasting conditions：A randomised，crossover，placebo-controlled study［J］.Drugs R&D，2007，8（6）：383-391.

［6］国家药典委员会.中国药典［S］.一部.北京：中国医药科技出版社，2010：219.

［7］郭墨亭，夏学进，黄雪松.胡椒碱的光异构化研究［J］.食品与发酵工业，2013，39（3）：52-55.

HPLC Determination of Piperine in Mongolian Medicine Preparation Hao Sen Bu Ru-13

Zhang Haitao1Lu Ying1Qi Xiangqun1Li Minhui2*（1.Chifeng Institute for Drug Control，Chifeng 024000，Inner Mongolia，China；2. Baotou Medical College，Baotou，Inner Mongolia 014060，China）

Objective：To establish a method for the determination of piperine in mongolian medicine preparation Haosenburu-13. Methods：A DiamonsiL-C18（250mm×4.6mm，5μm）column was used with the mobile phase being chromatographic methanol-water（77∶23），flow rate being 1.0mL·min-1，detecting wavelength being 343nm，the column temperature being 30℃.Results：The linear response range from 4～40μg·mL-1（r=0.9999，n=6）of piperine；the average recoveries（n=9）of the method was 98.19%with RSD 0.86%. Conclusion：The method is simple，accurate，reproducible and stable，and can be used for the quality control of mongolian medicine preparation Hao Sen Bu Ru-13.

Mongolian medicine preparation HPLC Hao Sen Bu Ru-13 Piperine Determination

R917

A

1672-8351（2016）08-0002-02