郑双双，刘贞，钟振华，夏红英，程奇珍

江西省药品检验检测研究院，国家药品监督管理局中成药质量评价重点实验室，江西省药品与医疗器械质量工程技术研究中心，江西 南昌 330029

吉西他滨是嘧啶类抗代谢药物，是细胞周期特异性抗代谢药物［1］，与其他药物联合应用治疗非小细胞肺癌（NSCLC）、上皮性卵巢癌宫颈癌、晚期胰腺癌、乳腺癌等［2-5］。注射用吉西他滨为注射用粉针剂，在分装、贮存过程中，药用卤化丁基胶塞用于制剂密封，直接长时间与药品接触［6］，而在胶塞生产过程中，需要加入多种添加剂，以此来延长药用胶塞的使用时间，其中还需要进行硫化处理，在该过程中不可避免的残留一些未降解的有害物质如游离硫［7］，根据国家食品药品监督管理局发布的《化学药品注射剂与塑料包装材料相容性研究技术指导原则（试行）》［8］，指出包装系统应与药品具有良好的相容性，引入的浸出物产生的风险应在控制安全范围内，本研究参考文献［9-11］，采用高效液相色谱法测定药品中游离硫的含量，经方法学验证该方法方便、准确，可用于注射用盐酸吉西他滨中游离硫的测定。

1 仪器与试剂

1.1 仪器

Waters Alliance 2695 型高效液相色谱仪，METTLER TOLEDO MS105 型电子天平，METTLER TOLEDO ML204 型电子天平，Hpp749 恒温恒湿试验箱、SYNERGY UV 超纯水机。

1.2 试剂、试药

硫（批号：20190610，CAS 号：7704-34-9，生产厂家：国药集团化学试剂有限公司，含量≥99.999%）。无水乙醇［批号：Lot.No.20161012，CAS 号：64-17-5，生产厂家：永华化学科技（江苏）有限公司，色谱纯］。甲醇（批号：Lot#WXBC8664V，CAS 号：67-56-1，生产厂家：SIGMA，色谱纯）。

2 试验方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Inertsil ODS-3 C18（250 mm×4.6 mm×5 μm）；柱温：35 ℃；流动相：甲醇-水（95∶5）；流速：1.0 mL/min；检测波长：264 nm；进样量：20 μL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品贮备液 精密称取硫25.58 mg，置100 mL 容量瓶中，加无水乙醇适量超声使硫溶解，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得浓度为0.255 8 mg/mL对照品贮备液。

2.2.2 供试品溶液 取样品2 瓶（规格0.2 g）、1 瓶（规格1.0 g）分别加水3 mL（规格0.2 g）、15 mL（规格1.0 g）使内容物溶解并转移至同一10 mL（规格0.2 g）、25 mL（规格1.0 g）量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.2.3 空白溶液 量取3 mL 水置10 mL 量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得。

2.3 线性关系试验

精密量取上述“2.2.1”项下对照品贮备液1 mL 分别置10、20、50 mL 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为⑦25.580 0 μg/mL、⑥12.790 0 μg/mL、⑤5.116 0 μg/mL 的对照品溶液，精密量取对照品溶液⑦1 mL 置10 mL 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为④2.558 0 μg/mL 的对照品溶液，精密量取对照品溶液⑥1 mL分别置10、20 mL 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为③1.279 0 μg/mL、②0.639 5 μg/mL 的对照品溶液，精密量取对照品溶液④1 mL置10 mL 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为①0.255 8 μg/mL 的对照品溶液。精密量取上述系列线性关系对照品溶液各20 μL，按照“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。以硫浓度（x，μg/ mL）为横坐标、峰面积（y）为纵坐标进行线性回归，结果详见图1。

图1 硫线性关系图

2.4 精密度试验

精密量取“2.3”项下对照品溶液⑤5.116 0 μg/mL 20 µL，连续进样6 次，记录测定结果。结果：硫的峰面积的RSD 为1.0%（n=6），表明仪器精密度较好。

2.5 回收率试验

取阴性样品（A 公司生产，批号：190119）两瓶，分别加水3 mL 溶解后，转移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”对照品贮备液0.1、0.2、0.3 mL 置上述量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，按照“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，按线性项下的回归方程计算，结果见表1。

表1 回收率试验

2.6 稳定性试验

取注射用吉西他滨供试品1 批（A 公司生产，批号：190119）2 瓶，分别加水3 mL 溶解后，转移至10 mL 量瓶中，精密量取“2.2.1”对照品贮备液0.2 mL 置上述量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，于0、2、4、6、8、12、16、20、24 h 按“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积。结果：硫的峰面积24 h 内基本不变，RSD%为1.2%，满足测定要求。

2.7 重复性试验

取注射用吉西他滨供试品1 批（A 公司生产，批号：190119）2 瓶，分别加水3 mL 溶解后，转移至10 mL 量瓶中，精密量取对照品贮备液Sa（精密称取硫12.99 mg，置50 mL 容量瓶中，加无水乙醇适量超声使硫溶解，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，即得）0.2 mL 置上述量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，滤过；按上述方法平行制备6 份供试品溶液，按照“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，按标准曲线法计算硫的含量，结果测得硫平均含量为52.59 μg，RSD 为1.0%，表明重复性良好。

2.8 定量限与检测限

分别精密量取对照品储备液Sa 适量，用无水乙醇稀释数倍，按照“2.1”项下色谱条件测定，记录峰面积，按信噪比为10∶1、3∶1 计算定量限、检测限。结果定量限为0.519 6 μg/瓶、检测限为0.259 8 μg/瓶。

3 样品测定结果与讨论

采用新建方法对8 家企业58 批次市售注射用吉西他滨进行测定，结果均未检出硫；采用新建方法对12 批次注射用吉西他滨0 月、3 月加速正置、倒置进行硫的测定，结果均未检出硫。由于0 月、3 月加速样品中均未检出硫，考虑硫从药品包材迁移的可能性不大，药品被污染的可能性较小，本品使用时硫所引发安全风险较低。

本方法采用高效液相色谱法测定游离硫的含量，该方法快速简单、准确、重复性好，适用于注射用盐酸吉西他滨中硫的含量分析。