张顺聪 郭丹青 李永贤 唐永超 杨志东 梁德* 李大星 莫国业 冯蓬勃

1. 广州中医药大学第一附属医院脊柱骨科，广州 510405 2. 广州中医药大学，广州 510400

目前治疗骨质疏松的药物主要作用为抑制骨吸收，但同时也会影响骨形成，甚至可能导致骨肿瘤[1]。因此为了减少骨量丢失，需要一种能够诱导成骨细胞生成的治疗方式。目前临床运用的有甲状旁腺素或新型的代谢药物如钙敏受体拮抗剂、Wnt通路抑制剂[2-3]，另外异黄酮是一种有前景的防治骨质疏松药物。淫羊藿苷是一种从中药淫羊藿中分离出的活性黄酮糖苷，临床常将淫羊藿用于治疗肾、关节及肝脏等疾病。实验表明淫羊藿苷可促进大鼠成骨骨髓间充质细胞像向成骨细胞分化，并促进成骨细胞的成熟和矿化和抑制破骨细胞生成[4]。传递成骨细胞和破骨细胞相互作用的一个重要信号通道为骨保护素(Osteoproteyerin， OPG) /核因子NF-κB 受体激活因子配体(ReceptorActivator of NF-κB Li gand, RANKL)/核因子NF-κB受体激活因子(ReceptorActivator of NF-κB, RANK)，淫羊藿苷对人成骨样细胞(MG-63)成骨分化，以及是否通过作用于OPG/RANKL影响成骨分化尚不明确。

1 材料和方法

1.1 细胞株

人骨肉瘤成骨样细胞系(购于中国典型培养物保藏中心，CCTCC编号号GDC074)。

1.2 药物

淫羊藿苷试剂(含量98%，上海纯优生物科技有限公司)，用DMEM培养基稀释并分别配制成1 nmol/ml，10 nmol/L，100 nmol/L，1 μmol/L，10 μmol/L，过滤分装后备用。

1.3 试剂及仪器

无酚红DMEM培养液；0.25%胰酶-EDTA;抗坏血酸，焦碳酸二乙酯(DEPC);TRIzol和胎牛血清(FBS,美国Gibico公司)；逆转录试剂盒(日本TAKARA公司)；引物(合成于life technology公司)；PVDF膜(美国Millipore公司)；OPG(Santa Cruz生物工程公司)、RANKL(Cell singnaling)、GAPDH抗体(Cell singnaling)；辣根过氢化物酶标记的抗兔二抗(Cell singnaling)。……